摘 要

本研究通过实地采集，从湖北省宜昌市五峰县采集白及药材5种，样品根据性状鉴定为白花白及、黄花白及和紫花白及（窄叶、中宽叶、宽叶）。总多糖提取方法为水提醇沉法，测定方法为紫外分光光度法，以苯酚-浓硫酸为显色剂进行测定，1,4-二[4-(葡萄糖氧)苄基]-2-异丁基苹果酸酯（militarine）测定方法为高效液相色谱法（HPLC）。结果表明，葡萄糖含量在0.01 ~ 0.05 mg/mL范围内线性良好，平均回收率99.45%，RSD为2.29%，样品白及总多糖百分含量为7.72% ~ 36.27%，其中窄叶的紫花白及含量最高。militarine含量在0.05 ~ 1.00 mg/mL范围内线性良好，平均回收率98.31%，RSD为1.69%，样品白及militarine百分含量0.78% ~ 7.25%，黄花白及含量最高。综合考察，白花白及质量最优，总多糖含量高于30%且militarine含量高于2.0%。本文建立一套白及有效成分含量测定方法体系，为湖北省宜昌市五峰县当地白及药材选育培养、持续研究开发打下基础，为白及质量评价体系的建立提供参考，为提升白及药材质量标准、强化监管创造了有利的环境。

关键词：白及；militarine；总多糖；含量测定

Abstract

In this study, we collected 5 kinds of Bletilla striata from Wufeng County, Yichang City, Hubei Province and identified them by character. We used water and ethyl alcohol to extract the crude polysaccharides and determined them by ultraviolet spectrophotometry with phenol-sulfuric as the color reagent. The militarine content was determined by HPLC method. The results show that the glucose content is in a linear relationship between 0.01 and 0.05 mg/mL, the average recovery rate is 99.45%, the RSD is 2.29% (n=6), the percentages of polysaccharides are 7.72% to 36.27%, of which the purple one has the highest content. The militarine content in the range of 0.05 to 1.00 mg/mL has a good linear relationship, with an average recovery rate of 98.31%, RSD of 1.69% (n=6), and militarine contents of 0.78% to 7.25%, of which the yellow one has the highest content. Based on a comprehensive investigation, the white one is of the best quality, which contains more than 30% polysaccharides and 2.0% militarine. This paper establishes a set of determination methods for the content of Bletilla striata active ingredients, which lays the foundation for the selection, cultivation and continuous development of local Bletilla striata in Wufeng County and creates a favorable environment for the quality standards of medicinal materials and strengthened supervision.

Key Words：Bletilla striata；militarine；polysaccharides；determination

目 录

第1章 绪论 1

1.1 白及概述及研究进展 1

1.1.1 化学成分与药理活性研究进展 1

1.1.2 物种鉴定方法研究进展 2

1.1.3 含量测定方法研究进展 2

1.1.3 种质资源及产业发展现状 3

1.2 研究目的与意义 3

1.3 研究内容 4

第2章 含量测定方法研究 5

2.1 实验原理及预实验 5

2.1.1 HPLC测定militarine 5

2.1.2 紫外分光光度法法测定总多糖 5

2.1.3 白及总多糖的提取方法 5

2.1.4 militarine含量测定的预实验 6

2.2 实验材料 6

2.2.1 样品信息 6

2.2.2 仪器与试剂 7

2.3 实验方法 9

2.3.1 实验技术路线 9

2.3.2 总多糖含量测定 9

2.3.3 militarine含量测定 11

2.4 实验结果与分析 13

2.4.1 总多糖含量测定结果与分析 13

2.4.2 militarine含量测定结果与分析 17

2.5 白及的化学成分测定小结 21

第3章 结果与展望 22

3.1 研究总结 22

3.2 研究不足之处 22

3.2.1 样本总量缺乏 22

3.2.2 白及总多糖提取方法不足 22

3.2.3 有效成分测定种类不全 23

3.3 研究展望 23

参考文献 24

致 谢 27

第1章 绪论

1.1 白及概述及研究进展

白及[ Bletilla striata ( Thunb.)Reichb. f .]属于兰科植物，其药用部位为干燥块茎，收载于《中华人民共和国药典》（2015版）（以下简称《中国药典》）中^[1]。虽然其古籍别名较多，但目前常用的药材名只有“白及”和“白芨”。

白及在我国药用历史已有2000多年，为近现代常用药材类别，极具药用价值。采集的白及植株的茎纤细或较粗壮，叶为狭长形，因采集时为冬天，未观察到白及花的特征，但根据当地培养员记录的照片可看出不同品种的花瓣有大有小，颜色以紫色和白色为主。药材白及始载于汉代《神农本草经》^[2]，其中详细记载有白及的性味、主治功效、别名和生长环境，但是没有关于白及用法、植物形态的描述。明代《本草纲目》将白及列入山草类，对其植物形态进行描述：“十月花，紫赤色，……，性难干” ^[3]。文献资料表明，古今使用的白及药材的植物形态、药物形状等方面保持一致。1963年后，白及收录进各版药典 ^[4]。国内外对白及药材的研究颇多，以下即针对其研究进展进行总结。

1.1.1 化学成分与药理活性研究进展

在早期对白及的研究中，多糖类物质是最先分离得到的有效成分^[5]。随着研究逐渐深入，相继分离得到包括菲类（phenanthrenes）及其衍生物、三萜类（triterpenes）、联苄类（bibenzyls）、糖苷类（glycosides）等约92个化合物，在这之中菲类是迄今为止分离得到最多的成分^[6]。白及新鲜块茎含有淀粉（30%~61%）、葡萄糖（1.5%）、黏液质（约55%），另外还含有咖啡酸、大黄素甲醚等^[7-9]。

目前以上化学成分中对于白及多糖的研究最为深入。白及干燥块茎的主要成分白及多糖，又名白及胶，为评估白及品质的重要依据^[10]。白及多糖^[4]（Bletilla striata polysaccharides, BSPS）是一种高分子黏性多糖，该成分使白及具有抗肿瘤、抗癌活性，止血活血活性，烧伤、溃疡等创面愈合作用，抗氧化作用，抗纤维化等药理作用^[4,6,11-16]。此外，白及多糖具有高黏度、助乳化、易成凝胶、安全无毒等特性，在药物制剂领域作为药用辅料应用广泛，如作血管栓塞剂的载体材料、膜剂的成膜材料、生物黏附制剂的黏附材料、凝胶剂的基质等^[14-15]。白及的日常应用主要在美容、保健等领域，其药效温和、无不良反应，可以作为牙膏使用，在治疗牙龈炎等口腔和牙科疾病时可起辅助作用，对牙龈出血问题疗效尤为显著^[17-18]。