摘 要

因化疗药物水溶性差、选择性低，所以有生物利用度低、毒副作用大等缺点。为了解决这些问题，本文选用苯丁酸氮芥（chlorambucil, CLB）作为抗肿瘤药物模型，制备了一种CD44受体介导的主动靶向给药系统。首先将透明质酸（hyaluronic acid, HA）转换成能溶于有机溶剂的四丁基铵盐HA-TBA；聚乳酸（polylactic acid, PLA）在DCC/NHS作用下生成聚乳酸活性酯PLA-NHS；然后在二乙胺（DEA）的催化下，将PLA通过酯键接到HA-TBA上，得到载体HA-TBA-PLA，对产物进行IR和NMR表征，并测载体胶束的粒径、zeta电位，设计正交试验确定最优反应条件；选用SOCl₂活化CLB的羧基，然后在三乙胺（TEA）催化下将CLB与载体连接，再除去TBA，最后得到HA-PLA-CLB，对其进行IR和NMR表征；用透析法制备载药胶束，得到HA-PLA-CLB靶向给药系统，测其粒径、zeta电位；测定该系统载药量，并进行其体外释药性能研究，结果表明在酸性环境中透明质酸酶的作用下释药性能较好，具有酸-酶敏感释药特性。因肿瘤细胞过度表达CD44受体，且其细胞环境呈酸性，所以该给药系统能靶向肿瘤细胞，在肿瘤细胞内释放CLB。因此，该靶向系统对肿瘤的治疗有很重要的研究意义。

关键词：主动靶向；透明质酸；聚乳酸；胶束

Abstract

Because of poor water solubility and low cell selectivity, chemotherapy drugs have some shortcoming, such as low bioavailability, toxic side effects and so on. In order to solve these problems, herein chlorambucil (chlorobucil, CLB) was used as an anti-tumor drug model to prepare a CD44 receptor-mediated active targeting drug delivery system. First, hyaluronic acid was converted into tetrabutylammonium salt HA-TBA which can be dissolved in organic solvent. Poly lactic acid was used to generate poly Lactic acid active ester PLA-NHS. With the catalysis of diethylamine, PLA was bonded to HA-TBA by ester bond to obtain carrier HA-TBA-PLA, which was characterized by IR and NMR. Measured the particle size and the zeta potential of the carrier micelles, and designed orthogonal test to determine the optimal reaction conditions. After the carboxyl group of CLB was activated by SOCl_2, CLB was connected to the carrier with the catalysis of triethylamine. Then removed TBA to prepare HA-PLA-CLB, and characterized it by IR and NMR. HA-PLA-CLB targeting drug delivery system was prepared by dialysis method, and the particle size and zeta potential were measured. Studied its in vitro release performance and tested the drug loading. The results shows that the release ability of hyaluronidase was better in acid environment, and the drug delivery system has acid - enzyme sensitive release characteristics. Because the tumor cells overexpress the CD44 receptor, and its cell environment is acidic, so the drug system can target tumor cells and release CLB fasterly in the tumor cells. Therefore, the targeting system has important research significance for the treatment of tumor.

Key Words： active targeting; hyaluronic acid; polylactic acid; micelles

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 绪 论 1

1.1 靶向给药系统 1

1.2 透明质酸与CD44受体 2

1.3 高分子纳米材料聚乳酸 3

1.4 抗肿瘤药物苯丁酸氮芥 4

1.5 实验研究内容和意义 5

第二章 HA-PLA的制备与表征 6

2.1 实验试剂及仪器 6

2.2 HA-TBA的制备 7

2.2.1 实验方案 7

2.2.2 HA-TBA的合成过程 7

2.3 PLA-NHS的制备 8

2.3.1 合成路线图 8

2.3.2 实验方案 8

2.3.3 PLA-NHS的合成过程 8

2.4 HA-PLA的制备 8

2.4.1 合成路线图 8

2.4.2 实验方案 9

2.4.3 正交试验设计 9

2.4.4 HA-PLA的合成过程 10

2.5 HA-PLA的表征 11

2.5.1 HA-PLA的傅里叶红外光谱表征 11

2.5.2 HA-PLA的核磁共振氢谱表征 11

2.6 本章小结 12

第三章 靶向给药系统HA-PLA-CLB的制备与表征 14

3.1 实验试剂及仪器 14

3.2 HA-PLA-CLB的制备 15

3.2.1 合成路线图 15

3.2.2 实验方案 16

3.2.3 HA-PLA-CLB的合成过程 16

3.3 HA-PLA-CLB的表征 17

3.3.1 HA-PLA-CLB的傅里叶红外光谱表征 17

3.3.2 HA-PLA-CLB的核磁共振氢谱表征 17

3.4 HA-PLA-CLB胶束的制备及表征 18

3.4.1 实验方案 18

3.4.2 HA-PLA-CLB胶束的制备过程 18

3.4.3 粒径和zeta电位的测定 19

3.5 本章小结 19

第四章 载药率测定及体外释药性能研究 21

4.1 实验试剂及仪器 21

4.2 载药率测定 22

4.2.1 CLB的标准曲线测定 22

4.2.2 载药率的测定过程 23

4.3 体外释药性能研究 24

4.4 本章小结 25

第五章 结 论 26

参考文献 27

致 谢 29

第一章 绪 论

恶性肿瘤又称癌症，难以治愈且生存率低，严重危害人类健康，其治疗方法主要有手术疗法，放射疗法和化学疗法^[1]。手术治疗是通过切除肿瘤达到治疗目的，但是肿瘤不易彻底切除，残留的肿瘤细胞转移或继续增殖会导致癌症复发。放射疗法指用放射线杀死肿瘤细胞的治疗方法，但治疗时会对人体正常细胞有极大的危害。化学疗法简称化疗，主要是通过化疗药物抑制DNA复制的作用来阻止肿瘤细胞的无限增殖，进而可以阻止癌症的发展。目前化学疗法是治疗恶性肿瘤最常用的治疗方法，但是化疗药物选择性低，对肿瘤细胞和人体正常细胞都有细胞毒性，对增殖较快的正常细胞毒副作用较大，如：骨髓抑制^[2]。为了增强化疗药物的治疗效果，改善癌症患者的生活质量，我们必须提高化疗药物对肿瘤的选择性。

针对化疗药物的选择性低这一问题，研究者们已经提出了许多解决方案，其中最有效的方法是将抗肿瘤药物制成靶向制剂。靶向制剂可以靶向到肿瘤组织并使抗肿瘤药物在肿瘤部位积累，有效提高了抗肿瘤药物对肿瘤细胞的选择性，增强药效；同时减少了药物在人体正常组织的分布，对正常细胞的细胞毒性减弱，毒副作用减小。随着医药领域各种技术的发展，研究者们针对肿瘤的靶向治疗发明了许多新型制剂，为新型靶向给药系统的设计和制备提供了很多新方法和新思路。

1.1 靶向给药系统

靶向给药系统指用有特定性质的载体材料对药物进行修饰，将其制备成能将药物传送至特定靶点并在靶点释放和浓集的新型制剂。为了提高化疗药物的肿瘤细胞选择性、减弱其对正常细胞的细胞毒性，目前对靶向给药系统的研究已经成为新剂型研究的一大热点。