摘 要

在这次实验中，通过多次对比试验，对岛津LCMS‐2020 上液质联用最佳条件进行摸索，现在已经找到了比较适合多肽的分析方法，配置流动相时，用 0.1%的甲酸替换掉 0.05%和0.065%的三氟乙酸，另外，在一般液质联用中用到的分流阀，因为其影响到流速和离子强度问题而被撤换。通过建立较为完善的LC‐MS 分析条件，实现了部门内部对于产品的分析以及杂质认定的目的，完善了QC部门的职能，同时能够更有效地配合上有合成部门进行工艺改进和优化。

关键词: LC‐MS，分析条件，产品性质认定， 杂质分析

Analysis of the conditions of liquid chromatography-mass spectrometry on SHIMADZU LCMS 2020 and identification of product properties and analysis of impurities

Abstract

In this experiment, the analysis method suitable for the polypeptide was found through the exploration of the liquid and mass combined conditions. In the flow phase, 0.1% formic acid was used to replace 0.05% and 0.065% of the three FLUOROACETIC acid. In addition, the shunt valve used in the general liquid and qualitative use was replaced by the flow rate and the ionic strength. Through the establishment of the analysis conditions of LC - MS, the purpose of the analysis of products and the determination of impurities in the Department is realized, the function of the QC department is perfected, and the synthetic department can be more effectively combined with the synthesis department to improve and optimize the process.

Key words: LC MS, analysis conditions, product property identification, impurity analysis

目录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 多肽样品 1

1.1.1 多肽的重要性及意义 1

1.1.2多肽样品的概述 1

1.1.3 多肽的常规检测方法 2

1.2 液质联用（LC-MS） 2

1.2.1 液质联用（LC-MS）的优点 3

1.2.2 探索液质联用最佳条件的目的 3

第二章 液质联用（LC-MS）实验部分 4

2.1 实验准备 4

2.1.1仪器连接 4

2.1.2流动相制备 4

2.1.3通用参数配置 4

2.2 起始原料和试剂列表 4

2.2.1仪器和辅助零件 5

2.2.2 实验试剂 5

2.3 实验结果与讨论 5

2.3.1第一次实验 5

2.3.2第二次实验 8

2.3.3第三次实验 11

第三章 结果与讨论 21

3.1 结论 21

3.2 改进 21

第四章 总结与展望 23

4.1总结 23

4.2 展望 23

参考文献 24

致 谢 29

第一章 绪论

1.1 多肽样品

1.1.1 多肽的重要性及意义

人体的正常活动离不开活性的物质的调节，其都是以肽的形式对人体的机能进行影响的，小分子活性肽对人体活动的影响包含了方方面面，其中就包括人体的激素的平衡、神经传输、细胞生长周期的控制和生殖活动等各个部分。

在许多生命活动过程中，活性多肽拥有着十分重要的作用，这意味着多肽也用于药物的研制，多肽类药物的研制范围包括我们平时谈之色变却无可奈何的肿瘤，然而除了肿瘤病变外，多肽类药物也在免疫防御和细胞增殖分化等方面有科研价值。所以近几年来，各种多肽药物推陈出新，迄今为止上市的多肽药物已达到80多个。多肽类药物不仅活性好，特异性强并且毒性比较小，在病人体内不会轻易产生蓄积，每年都有大量的多肽药物在进行临床实验。治疗糖尿病的艾塞那肽的成功上市就引发了类似药物的研发热潮。这也说明了多肽类药物的研发前景。

在最近几年，多肽行业快速发展，由于一些多肽对人体皮肤活力有促进作用，活性多肽对皮肤衰老有明显的修复作用，多肽又在护肤品行业掀起热潮，各大品牌都不能免俗地在产品中加入活性多肽。常见的EGF（Epidermal Growth Factor）--表皮生长因子，就是一种多肽，它在1962年被发现， 并且发现者在1986年被授予了诺贝尔生理学奖及医学奖。除了表皮生长因子（EGF）外，对皮肤保持健康活力有明显的促进作用的肽类物质还有胰岛素样生长因子-1 (IGF -1)、成纤维细胞生长因子(FGF)、转化生长因子-β (TGF -β)、血小板衍化生长因子(PDGF和角化细胞生长因子(KGF)等。这类多肽在护肤品方面的应用前景广阔。

1.1.2多肽样品的概述

多肽与蛋白质都是由氨基酸组成，他们的不同点在于多肽是由50或50个以下的氨基酸组成的，是通过肽键连接而成的小分子化合物。而蛋白质是一类生物大分子，它具有一条或多条多肽链。多肽呈现是一条氨基酸长链，其中可能会有FITC、C-Terminal、N-Terminal等各种修饰，有时还会对其进行各种转盐，常见的转盐种类有转醋酸盐（standard acetate）和转盐酸盐（standard phosphate），一条多肽分子量一般不会大于10000。

组成多肽的20种氨基酸分别是甘氨酸（Gly，单字母简写G、异亮氨酸（Ile，单字母简写I）、脯氨酸（Pro，单字母简写P）、酪氨酸（Tyr，单字母简写Y）、谷氨酰胺（Gln，单字母简写Q）、苏氨酸（Thr，单字母简写T）、天冬氨酸（Asp，单字母简写D）、精氨酸（Arg，单字母简写R）、组氨酸（His，单字母简写H））、丙氨酸（Ala，单字母简写A）、半胱氨酸（Cys，单字母简写C）、苯丙氨酸（Phe，单字母简写F）、亮氨酸（Leu，单字母简写L）、缬氨酸（Val，单字母简写V）、色氨酸（Try，单字母简写W）、谷氨酸（Glu，单字母简写E）、蛋氨酸（Met，单字母简写M）、赖氨酸（Lys，单字母简写K）、丝氨酸（Ser，单字母简写S）和天冬酰胺（Asn，单字母简写N）。其中明显酸性氨基酸有天冬氨酸（D）和谷氨酸（E），碱性氨基酸有组氨酸（H）、精氨酸（R）和赖氨酸（K），氨基酸的酸碱性直接影响了一条多肽的酸碱性，对多肽进入仪器检测前的预处理有着决定性的影响。PI值高的多肽样品，在预处理时应加入应加入些许甲酸，PI值低的多肽样品，应加入少量氨水，有利于MS对多肽样品的分析。其中值得注意的是，当一条多肽链有Formoc、Mal、CBA修饰时，预处理时不能加入氨水，有Boc修饰时，不加入甲酸。不同的酸碱性都会破坏多肽链的特殊修饰。

此次实验中我们挑选了4种不同序列的多肽样品。其编号、序列、分子量、进样量都如下图所示：

1.1.3 多肽的常规检测方法

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