木糖酸脱水酶的定向改造开题报告
2020-05-04 21:28:32
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
d-木糖酸脱水酶,系统命名是 d-木糖酸氢-裂解酶,催化木糖酸脱水反应。
木糖酸脱水酶有不同的菌株来源,比如嗜盐的古细菌富盐菌(haloferax volcanii)、新月丙杆菌(caulobacter crescentus)和假单胞菌(pseudomonas sp.)[1,2]。
d-木糖酸脱水酶有不同的菌种来源,不同菌种的脱水酶性质可能有较大的差别。
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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
1、菌株的构建 利用限制性内切酶、连接酶、pcr、核酸电泳等相关的工具和技术,将目的基因构建在表达载体质粒上 2、突变库的建立 提取重组菌株的质粒,利用随机突变中易错pcr的方法,建立突变库。
3、高通量筛选方法的建立 查阅文献资料,建立能够快速检测出底物或者产物的筛选方法作为初筛的方法,然后,建立相对应的检测方法作为复筛方法。
4、蛋白纯化以及动力学参数的研究 对筛选出来酶活较好的菌株进行扩大培养,对此种菌株进行蛋白纯化,做反应并计算出动力学参数。
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