摘 要

通滞苏润江片是由七种中草药精制加工而成的复方制剂，其组成药材分别为番泻叶、司卡摩尼亚脂、巴旦仁、西红花、秋水仙、盒果藤、诃子肉。经过几百年的广泛使用，其可靠的疗效使其成为新疆维吾尔医学乃至中药医学上的一笔宝贵财富。番泻叶是该制剂处方中的组成药材之一，其独特的药理作用与通滞苏润江片治疗类风湿性关节炎的药效作用有着直接关系。本课题选取番泻叶中重要有效成分番泻苷为指标来控制通滞苏润江片的质量。

本课题中采用TLC法、HPLC法为手段来研究通滞苏润江片中番泻苷的质量标准。在TLC法试验中主要完成了薄层方法的建立以及专属性考察、耐用性考察，试验结果表明斑点位置及颜色均清晰，阴性样品无干扰，在改变试验参数后，仍能得到相同的斑点，说明该法专属性强，耐用性好；在HPLC法试验中主要完成了该方法的建立以及专属性、线性、重复性、加样回收率等方法学考察，试验结果表明番泻苷A在99.8～998ng的范围内进样量与峰面积之间线性关系良好（R²=0.99999），平均回收率为99.61%，重现性实验RSD=0.644%；番泻苷B在200.2～2002ng的范围内进样量与峰面积之间的线性关系良好（R²=0.99999），平均回收率为99.64%，重现性实验RSD=0.716%，说明所建立的含量测定方法科学、合理。

关键词：通滞苏润江片；类风湿性关节炎；番泻苷；质量

Abstract

Tongzhi Surunjiang Tablet is a compound preparation made from seven kinds of Chinese herbal medicines. It contains medlar, colchicum, badanren, box fruit vine, sikamoniya, saffron, and senna. After several hundred years of extensive use, its reliable efficacy has made it become a avaluable asset in Xinjiang Uyghur medicine and even traditional Chinese medicine medicine. Senna is one of the ingredients in the formulation of the preparation, and its unique pharmacological effects are directly related to the pharmacodynamic effects of Tongzhi Jiangrun Tablets in the treatment of rheumatoid arthritis. This project selected sennoside, an important component of senna, as an indicator to control the quality of Tongzhisurunjiang tablets.

The objective of this project is using TLC method and HPLC method to study the quality standards of sennoside in Tongzhi Surunjiang Tablets. In the TLC test, the establishment of the thin layer method, the examination of the specificity, and the durability inspection were mainly completed. The experimental results show that the spot location and color were clear, and the negative sample did not interfere. After changing the test parameters, the same results were obtained under all conditions. The speckle shows that this method has strong specificity and durability; in the HPLC method, the establishment of the method and the methodological investigation of specificity, linearity, repeatability, and sample recovery were mainly completed. The test results show that linear relationship of sennoside A and peak area was between the range of 99.8~998ng(R²=0.99999), and the medial recovery rate is 99.61% with RSD of 0.644%(n=6); linear relationship of sennoside B and peak area was between tne range of 200.2~2002ng (R²=0.99999), and the medial recovery rate is 99.64% with RSD of 0.716%(n=6), indicating that the established method for determination of content is scientific and reasonable.

Key Words:Tongzhi Surunjiang Tablet;Rheumatoid arthritis;Sennoside;Quality.

目录

第一章 绪论 1

1.1 前言 1

1.2 处方组成 2

1.3 药物功效 2

1.4 处方分析 2

1.4.1 番泻叶 2

1.4.2 诃子肉 3

1.4.3 盒果藤 4

1.4.4 司卡摩尼亚脂 4

1.4.5 秋水仙 4

1.4.6 西红花 4

1.4.7 巴旦仁 5

1.5 研究目的及意义 5

第二章 通滞苏润江片中番泻苷A、B的质量标准研究 6

2.1 通滞苏润江片中番泻苷A、B的薄层鉴别 6

2.1.1 试剂与仪器 6

2.1.2 供试品溶液的制备 7

2.1.3 对照品溶液的制备 7

2.1.4 阴性样品溶液的制备 7

2.1.5 番泻苷A、B的鉴别 7

2.1.6 薄层鉴别方法的考察 7

2.2 通滞苏润江片中番泻苷A、B的含量测定 8

2.2.1 仪器与试剂 8

2.2.2 色谱条件 9

2.2.3 对照品溶液的制备 10

2.2.4 供试品溶液的制备 10

2.2.5 专属性试验 11

2.2.6 线性关系考察 11

2.2.7 重复性试验 12

2.2.8 加样回收率试验 12

2.2.9通滞苏润江片中番泻苷的A、B含量测定 13

第三章 结果与结论 15

参考文献 16

附录 18

致谢 20

第一章 绪论

1.1 前言

类风湿性关节炎是一种以关节滑膜炎为主的慢性系统性疾病，病理表现为滑膜衬里细胞增生，大量炎细胞浸润，形成血管翳，进而造成关节软骨和骨组织的破坏，最终导致关节畸形，严重者可致残废，影响患者的正常生活^[1]。该病是一种病因未明的慢性病^[2]，相关文献就起因提出以下几方面的可能性。首先外界环境，外界中某些病原体可以感染机体，从而刺激机体免疫系统，促炎因子释放量大额度增加，相关抗体的生成量也增加，导致病情的发作或恶化；其次遗传因素，患有类风湿性关节炎的患者家系亲属的患病率及同卵而生和非同卵双生的旁系亲属的患病率都会比一般人的患病率高得多；最后免疫系统的紊乱，此因素是类风湿性关节炎的主要病发起因，患者体内的免疫细胞功能增强，使得免疫系统失去平衡，相关的免疫活性物质如类风湿因子及某些促炎因子的增加，从而导致关节和软骨组织损伤。类风湿性关节炎发病早期病情发展相对迟缓，主要表现为运动时关节周围发热且带有轻度疼痛感、身体常感疲劳乏力、食欲不佳体重变轻或近侧指间关节肿大等轻微症状；晚期病症加重，甚至出现一系列的并发症，如关节的不可逆错位或畸形，肝脏、肾脏的受累损伤，病人自理能力的丧失等。

目前对于此病没有效果显著的根治办法，只是采取一些办法来缓解该病的病情，如针灸推拿、手术措施、服用药物等，其中服用药物是最常用的治疗手段。

现代西医依据类风湿性关节炎的病理作用及症状表现，用药上主张缓解疼痛、缓解关节炎症、修复已被破坏的关节等。常用的药物为非甾体抗炎药、慢作用抗风湿药、免疫抑制剂及各类西药之间的联合性应用^[3]。但治疗此病是一个长期过程，因此不得不考虑长时间用药给人体带来的损伤。用于治疗类风湿性关节炎的西药均带有一定的毒副作用或其它不良反应，长期服用会对人体的肝肾组织细胞及肝肾功能造成严重的负面影响。

而中医早在2000多年前就提出了关于类风湿性关节炎的医治手段，到现在已经形成了关于此病独特的理论见解以及各种治疗措施。在中医理论中，古代的中医大家将类风湿性关节炎纳入痹症^[5]。痹字最早出现在《山海经》，但只是单纯记载了这个病症，没有对其具体解释。对痹症的病因、病机、症状和治法进行了系统论述是在2000多年前的《黄帝内经》中。而后又经过了各朝各代中医大家的传承与创新，如汉代张仲景的《金匮要略》对汉朝以前类风湿性关节炎治疗经验的全面总结，将其由“痹症”改名为“历节风”，唐代孙思邈在前人的基础上，发明了“独活寄生汤”，此药方能够有效治疗类风湿性关节炎，至今仍然被广泛使用。历史在不断发展，中医始终一如既往的以充满生机的姿态与时俱进。今天中医治疗类风湿性关节炎仍然沿用古人的理论和药方，在用药上主张使用补虚药、祛风湿药、解表药及活血化瘀药等，其中关键是活血化瘀药^[4]。此类药物大多是处方制剂，将有抗类风湿性关节炎作用的药物通过处方合理配伍从而使各药物不良反应中和，且增强药效或者不降低其药效。

两者对比，不难看出中医相对于西医有以下几个方面的优势。首先中医的理论系统更为完善，《皇帝内经》中所提到的某些观点和现代西医所提出的观点存在相似之处，说明中医治疗类风湿性关节炎的理论是超前于西医的；其次中医的治疗经验更为丰富，中医在2000多年前就详细阐述了痹症的病因、病机、治法等，而后又经过了历朝历代中医大家的传承与创新，在这一历史的发展过程中所积累下来的治疗经验是西医这个近现代产物无法比拟的；最后中医更为安全，长时间服用西药会对患者的肝、肾等内脏器官造成损伤，在治疗此病的过程中给患者的健康增加了额外的隐患。因此，在长期服药治疗类风湿性关节炎的问题上，中药比西药更为适合。

通滞苏润江片便是中药治疗类风湿性关节炎中一个成功的处方制剂，它由七味不同的药材通过合理配伍然后经过现代制备工艺加工而成，在类风湿性关节炎的治疗药物市场上占有一定的地位。

1.2 处方组成

通滞苏润江片由番泻叶、诃子肉、秋水仙、巴旦仁、盒果藤、司卡摩尼亚脂、西红花七味药材构成^[5]。

1.3 药物功效

通滞苏润江片具有开通阻滞，活血化瘀，消肿止痛的功效^[5]。该药物的活性成分具有较强的温经通络，活化血液的作用，能够打通体内因湿寒而阻塞凝滞的脉络，改善局部血液循环，消散体内瘀血，使关节、肌肉的供氧恢复，减轻水肿，从根本上缓解疾病所带来的疼痛。

1.4 处方分析

1.4.1 番泻叶

番泻叶是一味目前使用较为广泛的中药材，追究来源，它属于外来的西药，由于其独特的药物疗效，在近现代我国的医师大夫频繁将其入药，一直延续到今天。在这个入药的过程中，番泻叶得到了广泛的认可，之后被纳入我国中药理论体系，出现在各种教材和医书中。番泻叶主要有两大类，狭叶番泻和尖叶番泻，其中狭叶番泻原产于印度，尖叶番泻原产于埃及。古代医书中没有任何关于番泻叶的记载，最早关于番泻叶的记录是在民族医学著作《回回药方》中，这也是同时期中国古代医书中唯一一部记载该药且能被考证的医书。番泻叶真正在中国境内的流传是在清朝末年，鸦片战争的影响使得西方医药大量传入中国，其中便包括番泻叶，这个时期的中药医书逐渐出现有关番泻叶的记录。在建国初期我国南方引入种植，现西双版纳、海南等多个地方均有栽培。直至今天，番泻叶已成为临床常用药，许多的科研也围绕其展开。

番泻叶中所含化学成分较为复杂，但绝大多数属于蒽醌类及蒽醌类衍生物，主要为番泻苷A、B、C、D，芦荟大黄素，游离蒽醌，蒽醌苷，大黄酸葡萄糖苷等^[6]，此外番泻叶还含有部分黄酮类化合物（如异鼠李素，山柰素等）、挥发油（如植物醇）和多糖（如丹皮酚多糖）。番泻叶受其有效成分的影响，其药理作用显示出多方面性，主要表现为抑制细菌繁殖、泻下、止血、解痉挛等。助泻作用，研究显示，番泻叶中的蒽醌类化合物如番泻苷可以促进人体胃肠蠕动，增强小肠的推进功能，减少胃肠道对水和电解质的吸收，从而导致腹泻，这也是番泻叶导泻药理作用的由来。止血作用，番泻叶能够促进血小板生成，加速血液凝固，减少血块收缩时间，从而起到止血的药理作用。解除痉挛，番泻叶可以阻断突触间神经递质的传递，使神经中枢的电信号无法抵达神经末梢、平滑肌等位置，肌肉组织的兴奋受到抑制，从而解除痉挛。抑制细菌的生长与繁殖，番泻叶中的蒽醌类及蒽醌类衍生物成分均具有抗菌作用，它们主要是通过改变细菌细胞膜的通透性，使细菌细胞内渗透压与外界压力存在较大差异，之后细菌因细胞内的电解质大量渗出而被杀死。正如前面所阐述的，外界环境可能会引发类风湿性关节炎，这是由于环境中一些病原体能够感染人体，机体免疫系统在受到外界刺激后被激活，炎症因子和相关抗体的释放数目大量增加，从而导致该病的发作。这种情况下，番泻叶的抑菌功效便起到很好的治疗作用，它能够抑制这些刺激人体免疫系统的病原体，减少机体抗体产生，从而抑制该病的病情。

1.4.2 诃子肉

诃子肉是一种在新疆维吾尔医学上使用较为频繁的药材，由诃子的成熟果实经过干燥加工制成。诃子是一种外来植物，原主要分布在缅甸等地，后引入中国的云南、广西等地。果实中含有多种有效成分，大多属于单宁类，占到了总量的20%～40%，主要有诃子酸、诃黎勒酸、没食子酸等。除单宁类成分外，果实中还含有奎宁酸、果糖、诃子素、多酚氧化酶等其他成分。据报道，诃子肉水溶性成分能够抑制痢疾杆菌、铜绿假单胞菌、溶血性链球菌、绿脓杆菌等病原体的活性，因而可用来清除引发类风湿性关节炎的各类病原体，减少因这些病原体刺激所引起的病情发作。

1.4.3 盒果藤

盒果藤，一种常见草木，主要分布在我国的广西、广东、云南等地。其根茎中含白桦脂醇、羽扇豆醇、β-谷甾醇等成分，具有一定的药理作用。将其根茎经过切断、干燥等加工作成中药材，具有消肿，通筋，活血的功效，可用于缓解类风湿性关节炎带来的关节疼痛。

1.4.4 司卡摩尼亚脂

司卡摩尼亚脂,主要产于巴基斯坦、巴勒斯坦、土耳其等地，是新疆维吾尔医学上的常用药物，由植物旋花的根部乳状渗出液经过干燥加工制得。司卡摩尼亚脂是一种由树脂、树胶、微量淀粉等构成的块状固体，其中树脂是其主要构成部分，占到了总量60%～80%的比例。本品主要功效为生干生热，清除机体异常体液（黏液质和胆液质），因而可用于治疗由类风湿性关节炎所导致的机体体液异常增加。

1.4.5 秋水仙

秋水仙，一种观赏性花卉，原广泛分布于欧洲和地中海沿岸，后在20世纪70时代我国开始引入其种子和球茎，用于园林种植。后经研究发现秋水仙还有着较强的药用价值，其花和鳞茎含有多种有效成分，对一些疾病有着明显的治疗作用。有效成分主要为秋水仙素、2-去甲秋水仙碱等生物碱类成分以及藤黄菌素、β-谷甾醇等非生物碱类成分。其中生物碱类成分均带有强烈的毒性^[8]，但是并不影响它们的药用功能，如秋水仙碱有着较强的抗炎作用、抑制作用（细胞的有丝分裂），故常用于乳腺癌、食管癌等癌症的治疗以及急性痛风的缓解，此外秋水仙花及球茎还可用于治疗坐骨神经痛和关节炎等。只不过在用药过程中，需要严格遵从医师要求或处方要求来控制秋水仙碱等的用量，否则很容易出现食欲不佳、体液电解质紊乱等中毒现象。

1.4.6 西红花

西红花为鸢尾科植物番红花（Crocus sativus L）的干燥柱头^[9]，其中所含的化学成分种类繁多，主要有黄酮类，萜类，挥发油类等，其中萜类成分所占比例最多，可通过分离得到藏红花苷I、藏红花苷II、α-胡萝卜素等多种成分。西红花活有着良好的药物功效，能扩张血管，加快血液流速，促进血液循环，改善炎症，因而常被用作活血化瘀药。

1.4.7 巴旦仁

巴旦仁，取自植物巴旦杏的种子。此植物为落叶小乔木，主要分布于我国的新疆地区及美国、巴基斯坦等地。其种子中富含不饱和脂肪酸，主要是单不饱和脂肪酸-油酸、亚油酸和棕榈油酸，除此之外还含有较多的粗蛋白(如清蛋白、球蛋白)、氨基酸(包括亮氨酸等人体必需氨基酸、谷氨酸等具有特殊药理作用的氨基酸)、人体必需的常量和微量元素(如K、Ca、Na、Fe)，由此可见巴旦仁的营养价值极高。自古以来维吾尔族人民就将其作为营养补品来食用，或是作为药材用来治疗干寒性或黑胆质性疾病，如干性肺虚咳嗽、身瘦体弱、记忆减退、面色苍白、视力下降等。

1.5研究目的及意义

番泻叶是通滞苏润江片中的一味重要组成药材，它的主要有效成分是番泻苷。该药材具有较强的抑菌作用，能够减少由于外界病原体感染而引起的类风湿性关节炎发作。番泻叶有着独特的药理作用，它可以直接影响到通滞苏润江片治疗类风湿性关节炎的药效作用。本课题旨在对番泻叶中重要有效成分番泻苷进行质量标准研究来控制通滞苏润江片的质量，对于提高通滞苏润江片的药效有着极为重要的意义。

第二章 通滞苏润江片中番泻苷A、B的质量标准研究

2.1 通滞苏润江片中番泻苷A、B的薄层鉴别

2.1.1 试剂与仪器

2.1.1.1 仪器

表2.1 试验所用仪器相关信息

2.1.1.2 试剂

表2.2 试验所用试剂相关信息

2.1.1.3 标准品及样品

番泻叶对照药材，中国食品药品检定研究院，批号120996-201205。

通滞苏润江片由武汉健民中维医药有限公司制备（批号：20180313、20180314、20180315，规格0.52g/片）。

2.1.2 供试品溶液的制备

取本品20片，除去薄膜衣，研细，取2g，精密称定，加70%乙醇30ml，超声处理30min,过滤，收集滤液，待滤液挥至无醇味，加水至15ml，转入分液漏斗中，氯仿振摇提取2次，每次20ml，弃去氯仿层，保留水层，水层加盐酸1ml,水浴加热5min,放冷，转入分液漏斗中，氯仿振摇提取两次，每次20ml,弃去水层，合并氯仿液，蒸干，残渣中加10.5%三氯化铁溶液15ml使其溶解，转移至烧瓶中，水浴加热回流15min,放冷，将混合液转入分液漏斗中，乙醚振摇提取两次，每次15ml,弃去三氯化铁层，合并醚液，蒸干，残渣加1ml甲醇使溶解，作为供试品溶液。

2.1.3 对照品溶液的制备

取番泻叶对照药材0.5g，加70%乙醇20ml,按“2.1.2”制成对照品溶液。

2.1.4 阴性样品溶液的制备

根据本品处方中各种药材和辅料的比例称取除番泻叶之外的其它六位药材及辅料，按通滞苏润江片的制备方法制成不含番泻叶的阴性样品。取阴性样品，除去薄膜包衣后，研细，称取粉末2g，按“2.1.2”制得阴性样品溶液。

2.1.5 番泻苷A、B的鉴别

吸取供试品溶液和对照品溶液各5ul,分别点于相同的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）上层液为展开剂，预饱和，展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后，于紫外灯光（365nm）下检视。

2.1.6 薄层鉴别方法的考察

2.1.6.1 专属性考察

吸取供试品溶液、对照品溶液和阴性样品溶液各5ul，分别点于相同的硅胶H薄层板上，以石油醚（30～60℃）-甲酸乙酯-甲酸（15:5:1）上层液为展开剂，预饱和,展开，取出，晾干，置氨蒸汽中熏后，于紫外灯光（365nm）下检视。

2.1.6.2 耐用性考察

分别对不同展开条件（不同温度、湿度、饱和时间）、不同比例的展开剂、不同点样量等条件进行考察，变动条件见表2.3。