论文总字数：19704字

摘 要

随着肿瘤发病率在我国的大大提高，抗肿瘤药物以及抗肿瘤机制研究变得炙手可热。

斑马鱼作为一种繁殖快、成本低、胚胎透明可视且外排卵的生物模型而成为现在抗肿瘤研究模型的一大热点。本实验主要通过在培养好的斑马鱼胚胎中显微注射光标记的SGC-7901细胞来建立斑马鱼异种移植模型，在此基础上进行pCAME的给药治疗作为阳性对照，同时与给0.1%DMSO作为媒介对照。通过观察和记录，建立参数计算来反映pAME对于异种移植所诱导的新血管生成具有抑制作用。我们还进行了qRT -PCR实验，证实了异种移植能响应一些癌症、炎症及免疫信号对癌细胞的活跃，而pAME可以通过调节多种信号传导通路来抑制肿瘤细胞诱导的血管生成。这些结果都表明了pCAME作为一种天然产物对肿瘤治疗有极大的研究意义，而且也提示我们斑马鱼异种移植模型在抗肿瘤药物评估上具有很大的优势。

关键词：斑马鱼、异种移植、对香豆酸甲酯、血管生成

Abstrat

With the dramatic increase in the incidence of tumors in our country, research on anti-tumor drugs and anti-tumor mechanisms has become hot.

The zebrafish has become one of the hot spots in the current anti-tumor research model as a fast-breeding, low-cost, biologically transparent and visible ovulation model. In this experiment, a zebrafish xenograft model was established by microinjection of a certain amount of fluorescently labeled SGC-7901 cells into cultured zebrafish embryos. On this basis, PCAME treatment was used as a positive control, 0.1% DMSO as the vehicle control at the same time. Through observation and recording, a parameter calculation was established to reflect PCAME can inhibit the tumor-induced angiogenesis. We also performed an qRT-PCR experiment to confirm that xenotransplantation can lead some cancers, inflammation and immune signal to cancer cells, and PCAME can inhibit tumor cell-induced angiogenesis by regulating multiple signal transduction pathways. These results indicate that PCAME as a natural product has great significance for the treatment of cancer, and it also suggests that our zebrafish xenograft model has great advantages in the evaluation of anti-tumor drugs.

Key words: zebrafish, xenotransplantation, p-coumaric acid methyl ester, angiogenesis.

目录

摘要 I

Abstract II

目录 III

一、绪论 1

1、我国肿瘤现状及发展趋势 1

2、血管抑制性抗癌药物的研究 1

2.1抑制肿瘤血管生成机制 1

2.2.血管抑制剂的研究进展 1

3、斑马鱼异种移植模型 2

3.1斑马鱼的特征 2

3.2斑马鱼异种移植模型在抗肿瘤药物研究方面的应用 2

3.2.1斑马鱼异种移植模型对抗肿瘤药物敏感性的评价作用 2

3.2.2基于斑马鱼模异种移植型研究药物的抗血管生成活性 3

3.3.3基于斑马鱼异种移植模型对药物的筛选 3

4、对香豆酸甲酯 3

二、实验研究 4

1、实验材料 4

1.1 实验动物 4

1.2 斑马鱼的饲养和胚胎处理 4

1.3 肿瘤细胞及其培养 4

1.4 实验药品 4

1.5 主要试剂 4

1.6 药物配制 5

1.7 主要仪器和耗材 5

2、实验步骤 6

2.1 SGC-7901细胞的准备 6

2.1.1 SGC-7901细胞株的培养 6

2.1.2 SGC-7901细胞的标记 7

2.2 斑马鱼异种移植模型的建立 8

2.2.1 斑马鱼胚胎的培养 8

2.2.2 斑马鱼胚胎的前处理 8

2.2.3 SGC-7901细胞的显微注射 8

2.3 分组给药 8

2.3.1 实验分组 8

2.3.2 药物处理 8

2.4 数据分析 9

2.4.1 图像采集 9

2.4.2 数据处理 9

3、QRT-PCR实验 9

3.1 给药处理 10

3.2 qRT-PCR 10

3.2.1 RNA抽离 10

3.2.2 样品CDNA合成 11

3.2.3 RT-PCR反应 12

3.2.4 mRNA表达水平分析 13

三、结果与讨论 14

1. 实验结果 14

1.1 PCAME对SGC-7901细胞诱导血管生成的抑制作用 14

1.2 PCAME抑制肿瘤诱导的血管生成机制 15

2. 讨论 16

2.1 PCAME 对SGC-7901的zCDX模型抗血管生成作用的讨论 16

2.2 qRT-PCR实验的讨论 16

四、结论与展望 18

1.结论 18

2.展望 18

参考文献 19

致谢 21

表1 主要缩略词表

一、绪论

1、我国肿瘤现状及发展趋势

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