摘 要

本文采用逆旋转蒸发法制备了和厚朴酚纳米粒。分别考察了不同温度、不同有机相与水相的比值、不同载药量等因素对和厚朴酚纳米粒制备的影响，经过了一系列的实验之后最终得到最适宜的制备条件。对制备出的纳米粒进行评价，选取了包封率作为评价指标，用紫外分光光度法测定含量，继而测定包封率。对和厚朴酚纳米粒进行了表征，包括粒径、形态分布、电位以及体外释放度，纳米粒的粒径在30.54nm左右，形态分布均匀，电位的绝对值较小，在pH=5时体外的释放度最佳。总的来说，和厚朴酚纳米粒的制备较为成功。

关键词：纳米粒子、和厚朴酚、形态特征

Abstract

In this paper, nookiol and honokiol nanoparticles were prepared by reverse rotary evaporation.The effects of different temperature, ratio of organic phase to water phase and drug loading on the preparation of magnolol nanoparticles were investigated, and the optimum preparation conditions were obtained after a series of experiments.The prepared nanoparticles were evaluated, the encapsulation rate was selected as the evaluation index, the content was determined by ultraviolet spectrophotometry, and then the encapsulation rate was determined.The particle size, morphological distribution and potential of magnolia officinalis and magnolia officinalis were measured.

Key Words:nanoparticles、Honokiol、characteristics

目录

第一章 绪论 1

1.1和厚朴酚的药理活性 1

1.2新型给药系统 1

1.2.1脂质体 1

1.2.2纳米粒 1

1.2.3聚合物胶束 2

1.3纳米粒载体材料 2

1.4和厚朴酚含量测定 3

1.5和厚朴酚在新型给药系统上的应用前景 3

第二章 和厚朴酚纳米粒制备 5

2.1实验仪器及材料 5

2.2 和厚朴酚纳米颗粒制备的温度考察 6

2.3 和厚朴酚纳米颗粒制备的最适宜有机相与水相比 8

2.4和厚朴酚纳米颗粒制备最佳药物量的选择 9

2.5检测和厚朴酚颗粒的粒径和zeta电位 10

2.6 形态学研究 10

2.7 紫外分光光度法测定含量 11

2.8体外释放度的研究 12

2.8.1体外释放度的意义 12

2.8.2释放度检查方法在我国的确立和发展 12

2.8.3释放度检查条件 13

2.8.4取样时间及方法 13

第三章 结果与讨论 14

第四章 全文总结 17

参考文献 17

致谢 19

绪论

1.1和厚朴酚的药理活性

和厚朴酚是从厚朴中分离纯化出来的，化学基本结构是联苯二酚，因此具有一系列药理作用。在应对焦虑、抑郁等外周神经疾病以及高血压、心绞痛等心血管疾病都有很大疗效。近年来的实验证明，和厚朴酚在治疗肿瘤时也有较大的活性，在治疗肿瘤的各个时期、各个环节均有较强作用。包括在DNA复制前期，间期、中期、后期均有效抑制了肿瘤的增殖，甚至可以诱导肿瘤细胞凋亡。 卵巢癌是最致命的妇科恶性肿瘤，也是第二常见的妇科恶性肿瘤，几乎占所有妇科癌症死亡人数的一半。大多数晚期卵巢癌患者都是通过手术、静脉注射紫杉醇来治疗的，但由于化疗耐药发生率高，故严重限制了化疗的效果。因此，需要新的治疗策略来提高传统化疗的安全性以及降低机体的耐药性。虽然多种临床试验表明和厚朴酚有很好的临床疗效。但由于和厚朴酚的水溶性较差，大多数研究都将其溶解在二甲基亚砜中进行研究，这种方式使得它的临床应用受到很大限制，为开发和厚朴酚的水性配方，本实验室采用逆旋转蒸发法制备了和厚朴酚纳米粒。

1.2新型给药系统

多个作用靶点是和厚朴酚在抗肿瘤作用过程中所具有的优点，更重要的是耐药性发生率低，这与其有多个作用靶点有很大关系。但是和厚朴酚在水中的溶解度小，故这种药物在临床上极少使用。为了改变这种困境，新型药物传递系统亟需被研究。近年来，关于新型药物传递系统的研究有了极其可观的突破，因此药学领域中存在进一步研究的问题，即难溶性药物的安全有效传递方式。本实验采用纳米粒制剂。

1.2.1脂质体

脂质体是药物被包封于载体形成的微型泡囊，载体的主要成分是磷脂和胆固醇，形式是双分子层。水溶性和脂溶性药物都可以制成脂质体，包括水包油性脂质体和油包水性脂质体，构成脂质体的主要原因是双分子层结构，这种结构在细胞生物膜中是常见的。这种结构可使药物与靶细胞、靶器官长时间作用，富集于细胞周围。脂质体可以减少药品的副作用、提高药品的安全阈值以及增加患者的顺应性。经过广泛研究发现，脂质体间接杀灭体内的肿瘤，还能保护容易遭到感染的组织。

1.2.2纳米粒

纳米粒是药物可溶解或包裹于其中或吸附在实体上的高分子材料组成的骨架，纳米粒载体系统能改善药物吸收和并且具有缓控释药的特点，除此之外，纳米粒载体系统还能加快药物吸收以及具有被动靶向性的特点，因此广泛应用于难溶性药物。和厚朴酚纳米粒利用肿瘤组织的EPR效应极大的提高了靶向性，借此可以改善抗肿瘤活性。EPR效应指的是相对于正常组织，药物更趋向于聚集在肿瘤组织。纳米粒利用这种效应极大的提高了靶向性，借此可以改善抗肿瘤活性，特别是对难溶性药物效果更是明显。和厚朴酚有良好的抗肿瘤作用，但是溶解度限制了其应用。为了增加其溶解度，可以制备成和厚朴酚纳米粒。和厚朴酚纳米粒在水中溶解度明显增大并且稳定性有了非常大的提高，更重要的是增加疗效，降低其他毒性。啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊

1.2.3聚合物胶束

聚合物胶束是同脂质体、纳米粒一样的新型药物制剂，其载药量大、结构大小合适、组织优良、缓释性好、渗透能力突出且使药物生物利用度增加。聚合物胶束具有亲水性头部和疏水内核，而内核可作为疏水药物的储库，这是因为水不溶性药物适合溶于聚合物胶束，很好的克服了药物的疏水性，因此注射和舌下给药的时候，聚合物胶束可作为难溶性化疗药物的外壳治疗肿瘤。啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊啊

1.3纳米粒载体材料

聚集沉积是药物常见的变质反应之一，为了防止纳米粒的沉积，一定量的表面活性剂常常被加入。常用的稳定剂有卵磷脂、白蛋白等。难溶性药物可以选用载体mPEG2000_PLA4000作为稳定剂。在纳米粒给药系统中mPEG2000_PLA4000主要有以下作用:(1)靶向作用:纳米系统应该对肿瘤细胞或组织具有一定的被动靶向性。其被动靶向性主要通过肿瘤组织的特殊效应，即EPR效应实现的，EPR效应指的是药物在实体瘤周围有渗透性和长时间富集的特点。(2)给药系统的载体:mPEG2000_PLA4000能增大药物在水中的溶解度，这是因为亲水性头部可以与亲水性头部互相结合。(3)处方的稳定剂:高速旋转与断裂的情况下，mPEG2000_PLA4000虽然是一种扭曲交错的状态却还可以保护药物粒子这是因为即使其中的二硫键断裂了，分子内及分子间还可以形成新的二硫键。本实验采用逆旋转蒸发法制备和厚朴酚mPEG2000_PLA4000纳米粒，主要以包封率、载药量等作为质量评价指标确定最佳处方和最适宜的条件。采用逆旋转蒸发法制备和厚朴酚mPEG2000_PLA4000纳米粒冻干粉以保证其不被分解;研究了该制剂的包封率、粒径、形态以及电镜图，并观察了药物效应学和药物动力学的相关性质。采用紫外分光光度法研究了和厚朴酚的含量分布以及制剂在大鼠体内的代谢情况。通过得到的药代动力学参数如半衰期、有效生物利用度及药物在身体器官内的分布，利用这些参数客观性地评价制剂，从而更好的进一步研究和厚朴酚mPEG2000_PLA4000纳米粒。作为一种用于化疗的药物控制传递系统(DDS)，生物降解聚乙二醇-己内酯-聚乙二醇(PEG-PCL-PEG, PECE)热敏水凝胶在早期工作中就得到了合成。PECE水凝胶是一种在室温下自由流动的溶胶，在体温下变为不流动的凝胶，作为药物的原位贮存库。热敏PECE水凝胶是一种可注射的药物传递系统，而不是腹腔输注装置。本研究旨在确定和厚朴酚纳米粒是否可以抑制卵巢癌SKOV3细胞在体内外的生长和用于 IP化疗的、作为体内一种新颖的控制剂型—聚合物基体和厚朴酚纳米粒水凝胶可以延长小鼠的生存轴承卵巢癌腹膜癌扩散(OPC)和显示更明显的抗肿瘤效应。中药厚朴是由木兰的树干、茎和根的干燥树皮制成的。它经常被用作许多传统处方中不可缺少的成分，用于治疗各种疾病，包括除湿、祛痰、祛除胀性便秘。厚朴的主要成分为厚朴酚、厚朴酚、四氢厚朴酚、异丁基厚朴酚、挥发油等,其中和厚朴酚被认为是厚朴皮层的主要有效成分。

1.4和厚朴酚含量测定

文献中测定和厚朴酚的分析方法主要有色谱法、电化学方法和紫外分光光度法。色谱法需要一系列的预处理或富集技术。电化学分析是一种新颖的测定和厚朴酚的方法， 但重夏性差、电极特殊等限制了其应用。已有一些研究探讨了用普通荧光分析法测定和厚朴酚的可能性，但也存在一些问题。此外，多维荧光光谱和行往物同步荧光光谱已被报道可用于同时测定和厚朴酚。但这些方法都受到计算程序夏杂、检测限较高的限制。采用紫外分光光度法测定纳米粒中和厚朴酚的含量，并与标准品对照来测定浓度。 该方法被官方推荐用于多种含有生色团药物的鉴定。该方法具有准确度高误差小、精密度好偏差小等优点紫外分光光度法以其灵敏度高、稳定性好、响应速度快等优点受到广泛关注。首先将纳米粒系统在紫外分光光度计里的吸收曲线测定出来，分别得到空白纳米粒和和厚朴酚的吸收曲线。找出一系列和厚朴酚的最大吸收峰。在这一系列峰中找到一个与空白纳米粒吸收无重叠的峰，此峰对应的波长便是实验所需要的最大吸收波长。本次实验确定的最大吸收波长为292nm。由于是在同一台仪器上操作，故可以用对照法测定含量，得到的结果误差较小，准确度高。即在同样条件下配置试样液和标准品溶液，稀释，在已选波长处，用紫外分光光度计分别测定吸光度。根据朗勃-比尔定律，A=Ecl，在最大吸光系数和相同比色皿厚度条件下，浓度比值便等于吸光度比值。因此可测定纳米粒系统中药物的含量，进而求出包封率。

1.5和厚朴酚在新型给药系统上的应用前景

和厚朴酚有多种药理作用，尤其是其抗肿瘤方面有多靶点、多环节、多效应的特点，并且不良反应低。对多种肿瘤细胞都表现出了一定的治疗效果，新型给药系统前景极其广阔。但在研发过程中也得小心翼翼，在提高疗效过程中把不良反应降到最低。药物制剂在近几十年得到了迅猛发展，未来的发展势头也会越来越好，相信在不久的将来，不仅可以将纳米粒用于和厚朴酚，一种稳定性更高，疗效更好的制剂也将能被研发出来，让和厚朴酚的疗效更加优良，从而让和厚朴酚在一线治疗药物中占据一席之地。可以挽救更多人的生命。

到了，听得懂，老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把老师告老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把诉老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把我老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把们老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把老师告诉我们，学生在我们眼里永远是最完美的，永远不可远是最完美的，永远是最完美的，永以把

责任丢给学生，自己该反思自己讲的有没有照顾到学生的平均水平，自己的讲课

和厚朴酚纳米粒制备

2.1实验仪器及材料

和厚朴酚纳米粒制备仪器见表2.1，试剂见表2.2

表2.1 和厚朴酚制备仪器

表2.2 试剂

2.2 和厚朴酚纳米颗粒制备的温度考察

取mpeg2000-pdlla4000 48mg，药物选择9.6mg，溶解在1ml乙腈中，用1ml针管滴加进5ml水溶液中，在不同温度下（25℃,30℃,35℃），用T10均化器（IKA，Germany）搅拌12h，将制备的和厚朴酚-mpeg2000-pdlla4000 溶液以20％（w / w）的浓度引入5ml水溶液中。约10分钟后，形成水包油（O/ W）乳液。然后mpeg2000-pdlla4000 在旋转蒸发器（BU CHI, Switzerland）蒸发，制得和厚朴酚纳米颗粒。通过紫外分光光度法测定制备的和厚朴酚纳米颗粒悬浮液中和厚朴酚的含量，和厚朴酚最大吸收波长选择292nm。求出最适宜的包封率和载药量，纳米粒载药量(DL)和包封率(EE) 测定如下：将10 mg冻干和厚朴酚纳米粒溶于0.1 mL乙腈中，采用紫外分光光度法测定了溶液中和厚朴酚的含量。包封率指的是药物总量中以粒子形式存在的药物占的比例。是评价纳米粒最为客观也最为重要的指标因素，这是由于药物以纳米粒和游离形式两种不同形式存在。包封率直观的反应了体系中药物以纳米粒形式存在的量。

方法:取和厚朴酚mpeg2000-pdlla4000 纳米粒溶液适量，12000r/1min离心，取上清液适量加入甲醇稀释，进样，紫外分光光度法法测定游离药物量。将以上所测值代入公式计算。根据公式(1)和(2)计算HK-NPs的DL和EE:

载药量＝×100％ （1）

包封率＝×100％ （2）

结果如表2.3：

表2.3 最佳温度确定表

2.3 和厚朴酚纳米颗粒制备的最适宜有机相与水相比

取mpeg2000-pdlla4000 48mg，药物选择4.8mg，溶解在1ml乙腈中，用1ml针管滴加进不同体积（5ml 、10ml 、15ml）水溶液中，在25℃下，用T10均化器（IKA，Germany）搅拌12h，将制备的和厚朴酚-mpeg2000-pdlla4000 溶液以20％（w / w）的浓度引入5ml水溶液中。约10分钟后，形成水包油（O/ W）乳液。然后mpeg2000-pdlla4000 在旋转蒸发器（BU CHI, Switzerland）蒸发，制得和厚朴酚纳米颗粒。通过紫外分光光度法测定制备的和厚朴酚纳米颗粒悬浮液中和厚朴酚的含量，求出包封率和载药量，纳米粒载药量(DL)和包封率(EE) 测定如下：将10 mg冻干HK-NPs溶于0.1 mL乙腈中，采用紫外分光光度法测定了溶液中和厚朴酚的含量。根据公式(1)和(2)计算和厚朴酚纳米粒的DL和EE:

载药量＝×100％ （1）