1. 研究目的与意义（文献综述）

研究背景：作为我国第六大的淡水湖泊滇池，由于外源污染物大量入湖，致使其水体呈富营养化状态，蓝藻水华时常发生。束丝藻水华爆发期间，严重破坏滇池内的生态平衡，使鱼大量死亡，造成重大的经济和生态效益的损失。当养殖水体中的有害微藻大量繁殖形成水华时，会消耗水体中大量的营养物质，抑制养殖水体中有益微藻的生长，同时在夜晚大量消耗水中的溶解氧，造成溶氧、ph值等昼夜变化剧烈。还会产生土臭味素等异味化合物，富集于养殖动物而影响其品质。当水华末期，水华藻大量死亡后，这些藻被分解时不仅会消耗水中大量的溶解氧，降低水体溶解氧；还会产生藻毒素、大量有机质、羟胺及硫化氢等有毒有害物质，败坏水质，直接危害养殖动物和水生生物的安全。

水华束丝藻(aphanizomenon flos-aquae) 是一种在世界性的富营养化水体中普遍存在且能够快速繁殖的丝状蓝藻。由于水华束丝藻能分泌束丝藻毒素（aphantoxins），研究发现，束丝藻毒素富含麻痹性贝类毒素成分（paralytic shellfish poisons (psps)），该毒素是一种毒性极强的神经毒素，对人体健康和环境安全将产生严重的影响。虽然麻痹性贝类毒素能影响细胞的电位门控钠离子通道而发挥它的毒性，且已经证明对鱼类的运动与游泳行为、脑功能及肝脏的功能产生影响，主要是通过影响神经功能而致毒，然而束丝藻毒素通过影响骨骼肌神经功能，造成骨骼肌糖代谢的生理生化水平的致毒效应和机制仍然不清楚，因此特选此题进行研究。

研究目的和意义：本研究以水环境污染产生的次生代谢产物水华束丝藻及其分泌的束丝藻毒素为实验材料，以斑马鱼为受试动物，以骨骼肌为关注对象，通过腹腔注射对动物进行毒素处理，在处理后的一段时间内的不同时间点，监测斑马鱼肌肉组织的糖代谢的变化，旨在探索斑马鱼骨骼肌糖水平及其代谢酶活性等相关生理生化指标变化对该神经毒素致毒的响应，拟揭示该水华及其毒素对骨骼肌糖代谢影响的神经毒性机理。为水产养殖、野生动物保护及人类健康提供新的参考依据。

2. 研究的基本内容与方案

本实验以滇池水华期间（2009）采集分离的水华束丝藻为材料，藻株经实验室鉴定、分离、纯化、培养、细胞内毒素抽提和纯化，毒素含量和成分分析后，通过腹腔注射（5.3 and 7.61mg stxeq/kgbw作为低浓度和高浓度）对斑马鱼进行毒素处理，以等体积的0.01mol的乙酸溶液为对照，在染毒后的24小时内的不同时间点（0,1,3,6,9,12 和 24h）速取斑马鱼骨骼肌组织，利用紫外分光光度法、酶联免疫吸附沉淀法（elisa）等方法，对其糖原合成酶（glycogen synthase）、葡萄糖激酶（glucokinase）、糖原磷酸化酶（glycogen phosphorylase，gp）、葡萄糖磷酸变位酶（phosphoglucomutase，pgm）、皮质醇（cortisol）、磷酸果糖激酶（phosphor-fructokinase，pfk)进行研究。

研究内容

1）观察斑马鱼在进行毒素处理后的24小时内的不同时间点（0,1,3,6,9,12和24h）斑马鱼的运动和生理活动；

3. 研究计划与安排

第2周：确定研究思路和研究方法的整理，设备的熟悉等

第3周：通过对文献的阅读认识，对论文内容进行具体的思考，药品配制、预实验、完成毕业论文开题报告，确定实验技术路线，确定具体的实验方案，

第4周：进行预实验、模式方法，熟悉掌握实验过程和步骤、掌握实验具体情况，等

4. 参考文献（12篇以上）

[1] 刘敏,母义明. ampk在运动介导的骨骼肌糖脂代谢中的作用[j].国外医学(内分泌学分册),2005,25(3):205-207.

[2] 陶霞,张宇.不同持续时间离心运动对大鼠骨骼肌ldh和sdh的影响[j].科技视界,2013,(35):113-114.