1. 研究目的与意义（文献综述）

如今，转基因动物在各个领域应用的越来越广泛，其中，转基因小鼠是应用的最广泛的转基因动物。小鼠个体小、温顺、容易饲养，具有和人类相似的发育过程和组织解剖结构，除了和人类有极为相似的生理解剖结构和胚胎发育过程以外，其基因组序列的分析表明，99%的人类编码基因都可以在小鼠基因组中找到对应的同源基因，两个物种基因之间的序列同源性高达80%以上，同时染色体上基因之间的排列关系也在小鼠和人类基因组中高度保守。所以转基因小鼠是研究人类基因最重要的模式动物。

转基因小鼠的建立主要是通过显微注射，而原核显微注射是应用最广泛的技术。原核显微注射是利用显微操作系统和显微注射技术将外源目的基因直接注入到受精卵的原核中，使外源基因整合到受体细胞的基因组内，再通过胚胎移植技术将整合有外源基因的受精卵移植到受体动物的子宫内发育，从而获得转基因动物。

影响原核显微注射效率的方面有很多，比如注射针的粗细，注射液dna的浓度，受孕鼠的状态，dna的种类等。其中注射浓度是十分重要的一个因素。浓度低会容易导致整合失败，无阳性小鼠，而浓度高会导致溶液毒性大，受精卵无法发育成功。但是注射浓度往往又是一个比较稳定的数值，相比其他因素而言，其更容易控制，而且对效率的帮助往往很大。本文的目标即确定一个较为精确的注射浓度，以提高显微注射的效率。

2. 研究的基本内容与方案

2.1 基本内容：

原核显微注射制作转基因动物时注射dna浓度的不同对转基因效率有明显影响，本文通过注射三种不同dna（pcag-irf1、pcag-irf2、pcag-irf3）时，对每种dna分别注射五个梯度浓度分别为1.0ng/ul、1.5ng/ul、2.0ng/ul 2.5ng/ul，3.0ng/ul；然后将三种dna注射的结果进行对照，从而根据得到的转基因阳性率判断不同浓度对其效率的影响，最后选择最适注射浓度。

2.2 技术方案：

3. 研究计划与安排

第1-2周： 了解论题，认识所需完成的主要内容和任务；搜集相关学术期刊、论文、文稿、专利、教材

资料，阅读后进行总结，对论题形成一个初步的系统性的认识。

第3-4周： 完成毕业论文开题报告，确定实验技术路线，确定添置实验所需的材料、仪器和试剂。确定

4. 参考文献（12篇以上）

[1] celebi c，guillaudeux t，auvray p，et ai．the making of“transgenic spematozoa．” [j] biol reprod，2003．68：1477一1483．

[2] chan aw.transgenic animals：current and altemative strategies [j] cloning，1999，1：25—46．

[3] mullins lj，mullins jj． transgenesis in the rat and larger mammals[j]．j clin invest，1996，97：1557—1560.