1. 研究目的与意义（文献综述）

群体感应 (quorum sensing，qs)是指细菌与细菌之间的通讯交流机制，通过分泌信号分子诱导细菌中特异性基因的表达，qs可以影响细菌的群体行为和生理生化特征 , 包括动植物致病菌的致病力、发光菌的生物发光性、共生、毒性因子表达、感受态、接合、 抗生素的产生、运动性、孢子形成以及生物膜的形成等。 qs控制着病原菌的致病性和某些细菌生物膜的形成，调控细菌的生命活动，表现细菌群体的反应和功能。细菌群感效应的淬灭就是指细菌群感效应的抑制方法。通过降解群感信号分子，有利于抑制生物膜的形成，提高现有抗菌策略的效率。n-酰基高丝氨酸内酯（ahls）是qs中最具特征的细胞-细胞通讯信号，降解ahls可有效抑制细菌群感效益，治疗感染的功效。

目前，国内外已在多种细菌中发现不同ahl降解酶，根据酶的催化机制分为ahl内脂酶、ahl酰化酶和ahl氧化酶，在这些酶中，α-内酯酶是近年来研究的热点。aidh是来自ochrobactrumsp. 的α/β水解酶折叠家族成员的一种新型n-酰高丝氨酸内酯酶，分子大小为29.5kda，具有水解ahl高丝氨酸内酯环酯键的作用，在破坏群体感应效益、预防和治疗感染方面具有很大的前景，与现有的ahl酶同源性很低，且与之前发现的ahl酶不同，它不具有金属结合基序，是一个非金属依赖的酶。目前已有关于aidh结构及作用机理的报道，aidh的总体结构为两域结构，由一个典型的α/β水解酶折叠核心域组成，该核心域由一个帽域覆盖，其活性位点是保守的丝氨酸蛋白酶型催化三联体：ser102、his248和glu219，通过活性部位与底物在质子化与去质子化过程中，达到水解内酯环的效果。冰核蛋白（ice nucleation protein, inp）是一种分泌性的外膜蛋白，其 n 端结构域负责锚定于细胞表面，因此可利用只含有 n 端结构域的 inp 在大肠杆菌表面展示外源蛋白。细菌表面展示技术已成为蛋白质研究领域的新技术，可用于呈现大分子蛋白，并能够使酶促反应在细胞表面直接发生从而大大提高反应效率，同时很好地避免宿主细胞胞内酶对外源蛋白的降解影响，克服某些反应产物在细胞内不能进行特定的构型折叠等弊端。

故而本研究利用只含有 n 端结构域的冰核蛋白在大肠杆菌表面展示aidh蛋白，构建、表达和纯化inp-aidh重组蛋白，探讨inp-aidh重组蛋白在抑菌、降解c6-hsl及研究inp-aidh对生物膜的抑制方面的功能，同时探讨对inp-aidh蛋白的固定化，旨在获得具有抑菌和治疗感染的材料，获得实用效益。

2. 研究的基本内容与方案

研究（设计）的基本内容、目标：

为深入探讨aidh的功能及效益，本研究将利用只含有 n 端结构域的冰核蛋白在大肠杆菌表面展示aidh蛋白，构建重组蛋白inp-aidh，对inp-aidh重组蛋白进行表达、纯化，计划获得纯度95%以上的重组蛋白，并用以探讨

1. inp-aidh重组蛋白在平板上的抑菌效果

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   3. 研究计划与安排

   第1周：了解论文题目，认识所需完成的主要内容和任务；搜集相关学术期刊、论文、文稿、专利、教材等资料，阅读后进行总结，对论题形成一个初步的系统性的认识。

   第2-3 周：完成毕业论文开题报告，确定实验技术路线，确定具体的实验方案和步骤。

   第4-8周：inp-aidh重组蛋白表达、纯化、固定化、抑菌实验、降解能力实验以及对生物膜的抑制。

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   4. 参考文献（12篇以上）

   [1] mei g-y, yan x-x,tuak a, et al.(2010) aidh, an alpha/beta-hydrolase fold family member from an ochrobactrumsp. strain, is a novel n-acylhomoserine lactonase. applied and environmentalmicrobiology, 76(15): 4933-4942.

   [2] gao a, mei gy, liu s, et al.(2012). high-resolution structures of aidh complexes provide insights into anovel catalytic mechanism for n-acyl homoserine lactonase. actacrystallographica. section d, biological crystallography, 69(pt 1) :82-91.

   [3] he l，wang s，geng x． coating and fusing cellmembranes onto a silica

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