摘 要

冬凌草甲素作为一种二萜类化合物，对于癌症的治疗具有显著的效果。目前，关于冬凌草甲素的研究主要集中在结构修饰及抗癌机制上，分离纯化的报道相对较少。而现有的分离工艺大都存在设备投资大、耗时、有机溶剂使用量大等弊端。因此，本文以提高冬凌草甲素的萃取率和纯度为目标，优化了冬凌草甲素的提取工艺并利用大孔树脂对其进行纯化。

首先，对冬凌草甲素的提取工艺进行探究，考察了提取时间、萃取剂浓度及料液比对冬凌草甲素提取率的影响。结果表明，最佳的提取时间为120min，萃取剂浓度为90%，料液比为1:10，以对之后的大孔树脂吸附奠定基础。

其次，利用静态吸附实验，对比了NKA-9、DM130、HP-20、AB-8、D101五种大孔树脂对冬凌草甲素的分离性能，优选出HP-20树脂。考察了解吸剂浓度对冬凌草甲素解吸的影响，发现当解吸剂浓度为75%时，解吸率高达98%。最后对大孔树脂吸附冬凌草甲素进行了动力学拟合，计算出准二级动力学模型适合用于描述大孔树脂吸附冬凌草甲素的吸附过程。

关键词：冬凌草甲素；提取；纯化；大孔树脂；

Study on Separation and Purification of Oridonin from Rubescens

ABSTRACT

Oridonin, a natural compound of kauritan type tetracyclic diterpenoids, has a significant effect on the treatment of cancer. Modern research focuses on structural modification and anticancer mechanism. However, there are relatively few reports on the purification of oridonin. Current isolation methods exist many drawbacks as large equipment investment, time-consuming. Therefore, this paper optimizes the extraction process and separates oridonin using resins, which aims at improving the extraction yield and the purity of oridonin

Firstly, the extraction process of Oridonin was investigated. The effect of different operate conditions (including extraction time, ethanol content and solid-to-liquid ratio) on extraction yield was studied. Results indicated that the optimal conditions were: extraction time 120 min, 90% ethanol content and solid-to-liquid ratio of 1:10.

Combined with static adsorption experiment, he separation characteristics of four different macroporous resins (NKA-9、DM130、HP-20、AB-8、D101) on oridonin were evaluated firstly. HP-20 was the suitable resin to isolation oridonin. The effect of eluting concentration was also studied. Result demonstrated that 75% ethanol was the best strippant with desorption ratio was 98%.Finally, the macroporous resin adsorption of Oridonin was kinetically fitted, and the quasi-secondary kinetic model was calculated to be the most consistent with the adsorption process of macroporous resin adsorbing Oridonin.

KEY WORDS: Oridonin;Extract; purification;Macroporous resin;

目录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章 文献综述 1

1.1 冬凌草甲素简介 1

1.2冬凌草甲素的应用 1

1.3冬凌草甲素的提取方法 2

1.3.1 传统的提取方法 2

1.3.2 工业中的提取方法 2

1.3.3 新型提取方法 3

1.4冬凌草甲素的纯化方法 5

1.4.1传统分离方法 5

1.4.2大孔树脂分离 5

1.4.3 二维逆流色谱法（Counter-current chromatography） 6

1.5研究内容和目的 6

1.5.1 研究的内容 6

第二章 冬凌草甲素的提取工艺研究 8

2.1 主要实验仪器及原料 8

2.1.1主要仪器设备 8

2.1.2 主要实验试剂和原料 8

2.2 实验过程及分析方法 9

2.2.1 冬凌草甲素分析方法的建立 9

2.2.2 高效液相色谱分析 10

2.2.3冬凌草甲素标准曲线的建立 11

2.2.4加样回收率实验 12

2.2.5 冬凌草甲素基本分析方法的建立 12

2.3不同影响因素对冬凌草甲素提取率的研究 13

2.3.1 料液比对萃取冬凌草甲素的影响 13

2.3.2 萃取剂浓度对萃取冬凌草甲素的影响 14

2.3.3 萃取时间对萃取冬凌草甲素的影响 14

2.4 结果与讨论 15

2.4.1合适萃取料液比 15

2.4.2 萃取剂浓度的影响 16

2.4.3 萃取时间的影响 16

第三章 大孔树脂分离纯化冬凌草甲素 18

3.1 主要实验仪器及原料 18

3.1.1实验仪器 18

3.1.2 实验试剂及原料 18

3.2实验部分 19

3.2.1 大孔树脂的预处理 19

3.2.2 冬凌草甲素水溶液的制备 19

3.2.3 静态吸附与解吸实验 19

3.2.4 解吸剂浓度的确定 20

3.2.5 静态吸附与解吸动力学 20

3.3结果与讨论 23

3.3.1 大孔树脂筛选 23

3.3.2静态吸附、解吸动力学拟合 24

第四章 结论与展望 30

4.1 结论 30

4.2 展望 30

参考文献 31

致谢 33

文献综述

1.1 冬凌草甲素简介

冬凌草Rabdosia Rabdosia(Hemsl.)Hara，是唇形科香菜属植物，碎米桠变种，别名冰凌草，冰凌花，多年生亚灌木或草本，它的植株能够生长出一种像蝉翼一样薄的蝶形冰凌状片，形态奇特，因此而得名^[1]。

冬凌草中含有迷迭香酸、冬凌草甲素和冬凌草乙素3种主要活性成分^[2]，其中冬凌草甲素，最开始是从香菜中分离出来的一种天然的化合物，在中国和其它东南亚国家常常 作为家庭药物使用。后来发现冬凌草中冬凌草甲素的含量最高，远高于其他药用植物。在中国当代，冬凌草记载在1977年和2010年发行的《中国药典》中：味道微苦、微寒，具备良好的消肿止痛、清热解毒、抑菌、抗肿瘤的功效。我国冬凌草广泛种植在黄河流域和其广大的南部区域，以河南省为其主要产区。冬凌草中主要化学成分有几种：二萜类化合物、三萜类化合物、甾体类化合物、酚酸类、黄酮类、有机酸和挥发油类^[3]等。我国的中药界专家一致认为冬凌草中的冬凌草甲素具有抗癌的功效。

目前市场上关于冬凌草类的药物主要分为：片剂、糖浆剂、颗粒剂，这些可用于治疗扁常见的桃体炎、咽炎等慢性病。也用于癌症的辅助治疗药物。临床显示：冬凌草中 提取出的冬凌草甲素具有很强的抗肿瘤活性，对肝癌^[4]、肺癌^[5]、贲门癌^[6]、膀胱癌^[7]等癌细胞的活性有较强的抑制效果。

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