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摘 要

多肽是一类普遍存在于生物体内的由氨基酸组成的化学物质。现如今在临床检测、医学研究、疾病防治和治疗等方面都有着广泛的应用。由于多肽广泛存在于自然界，所以我们可以通过多种途径来获取多肽，例如直接分离提纯和人工合成等。化学合成方法分为液相合成和固相合成两种，其中固相合成法又以每步反应的后处理操作简单，产率较高且能够实现自动化等优点在未来的多肽合成中占据优势地位。

本文主要描述的是化学合成中的固相合成法来合成依色格南、培西加南和GLP-1的过程。利用Wang树脂和Rink树脂作为固相载体，多种保护氨基酸作为原料，多步缩合反应得到粗品后，通过仪器来进行分离纯化得到纯的依色格南、培西加南和GLP-1。

关键词：多肽，固相合成，依色格南，培西加南，GLP-1

The Synthesis of Bioactive Peptide

ABSTRACT

Peptides are a kind of chemical substances which are commonly found in vivo with the composition of amino acid. Nowadays peptides have a wide range of applications in clinical testing, medical research, disease prevention and treatment and so on. As peptides are widespread in nature, we have a variety of methods to get the peptides, like direct separation and purification or synthetic. Synthetic methods are divided into liquid phase synthesis and solid-phase synthesis, and solid phase synthesis which has advantages of simple operation of the reaction post-processing each step, high yield and the automation can be achieved in the future dominant position in peptide synthesis.

This paper describes the process of the synthesis method to synthesize Iseganan, Pexiganan and GLP-1 in solid phase. Using Wang resin and Rink resin as solid phase carrier and a variety of protected amino acids as raw materials. After multi-step condensation reaction crude, we get the purified products through instruments.

Key Words: Peptide; Solid-phase synthesis;Iseganan;Pexiganan;GLP-1

目 录

摘 要 I

ABSTRACT II

第一章 综 述 1

1.1 多肽药物概述 1

1.1.1 多肽类药物的开发前景 1

1.1.2 多肽药物的分类 1

1.2 多肽的化学合成 3

1.2.1 多肽合成方法及其原理 3

1.2.2 固相合成分类 4

1.2.3 肽键形成的反应原理 4

1.3 多肽的Fmoc固相合成 5

1.3.1多肽固相合成中树脂的选择 5

1.3.2 固相合成反应的检测 6

1.3.3氨基酸官能团的保护及脱除 7

1.3.4侧链保护基和树脂的裂解 7

1.4 合成多肽的分析与纯化 7

1.5 本课题的内容 8

第二章 实验部分 9

2.1 实验仪器与化学试剂 9

2.1.1 仪器与设备 9

2.1.2 化学试剂 9

2.2 实验操作 12

2.2.1 依色格南的合成 12

2.2.2 培西加南的合成 14

2.2.3 GLP-1的合成 14

2.2.4 多肽的分离和纯化 15

第三章 结果与讨论 16

3.1 依色格南的结果分析 16

3.1.1 HPLC分析 16

3.1.2 MASS图 17

3.2 培西加南的结果分析 19

3.2.1 HPLC分析 19

3.2.2 MASS图 20

3.3 GLP-1的结果分析 20

3.3.1 HPLC分析 20

3.3.2 MASS图 21

3.4 实验分析与讨论 22

4.1 结论 24

4.2 展望 24

参考文献 25

致 谢 27

第一章 综 述

1.1 多肽药物概述

1.1.1 多肽类药物的开发前景

近几十年来，许多的生物活性多肽被提取和发现，它们在人体中的作用被越来越多的科学家所关注和研究。研究表明，多肽药物在进入人体后，大部分仍然是以肽的形式被吸收的。并且发现，与相同组分的氨基酸相比人体吸收多肽的速度要更快。最理想的多肽药物是具有人源蛋白质分子的结构，以免引起免疫反应。多肽涉及的科学领域非常广，它对人体的细胞生长、神经系统和生殖系统都有一定的药理活性 ，对许多疾病如癌症、免疫性疾病、高血压以及心脑血管疾病都有显著的疗效。多肽类药物与其他小分子药物相比有很大的区别，其最主要的特点是用量小、特异选择性强、要用效价比高和人体毒性反应相对较弱。在医药、食品、保健品、化妆品等方面都可以应用到生物活性多肽。随着科学技术的发展，多肽药物将成为未来人类预防、诊断、检测和治疗疾病的一个非常重要的手段。

多肽药物的研发从二十一世纪以后进入快速发展期，收到了国内外大型制药公司及众多新药研发机构的广泛关注，多肽药物在新药研发中所占的比重也越来越大。目前每年进入临床前研究的多肽药物数量每年增长幅度超过了30%，销售收入增长超过20%。有多个多肽药物进入了重磅药物的行列，如Copaxone（醋酸格拉替雷）、Lupron（醋酸亮丙瑞林）、Zoladex（醋酸戈舍瑞林）以及Sandostain（醋酸奥曲肽）等，每年的销售额都超过了10亿美元。目前，在世界范围已经获批准上市的多肽类药物到2010年为止已经超过了50个，大约有140个多肽类药物已经应用于临床研究，而处于临床前研发阶段中的多肽类药物达到500至600个。由此可见，对于多肽类药物的研究将具有广阔的应用前景。

1.1.2 多肽药物的分类

根据多肽药物的不同药效作用和功能，大致可以将多肽药物分为以下7大类:

1.1.1.1多肽疫苗

20 世纪人们发明了疫苗，疫苗的出现有效地降低了人类传染病的发病率和死亡率。但传统疫苗是减毒或灭活病原体，存在一定的毒副作用。随着分子生物学和免疫学研究的快速发展，DNA疫苗、基因工程疫苗、抗体疫苗等一些新形式的疫苗不断出现。20世纪80年代Strohmaier等从口蹄疫病毒的146到154及200到213的氨基酸的肽段发现了免疫性位点，从而找到了一种新型的疫苗，即多肽疫苗。自此以后，国内外许多生物化学工作者对多肽疫苗的开发进行的大量的研究工作。在疫苗研究领域内，多肽疫苗是一个较受重视的研究方向。

合成肽疫苗 (synthetic peptidevaccine)就是用化学合成抗原表位氨基酸序列法制备而成的具有保护性作用的类似天然抗原决定簇的多肽疫苗，这种疫苗不含核酸，是最为理想的安全新型疫苗，也是目前研制预防和控制感染性疾病和恶性肿瘤的新型疫苗的主要方向之一。

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