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1. 1. 毕业设计（论文）的内容、要求、设计方案、规划等

《dna聚合酶pfu的提取与纯化》

pfu酶是分子生物学实验室常用的dna聚合酶，通常有较大的需求量，造成了一定的科研成本负担。因此，如果能够摸索一套快速、简单的pfu酶制备方法，在一定程度上有利于降低试验成本，增加试验稳定性。本项目我们将研究pfu重组蛋白的提取纯化方案，确定其克隆表达和纯化方案的关键参数，建立一套快速纯化重组pfu酶的可靠方法。

具体要求如下：

2. 参考文献（不低于12篇）

[1] Lundberg KS, Shoemaker DD, Adams MWW, Short JM, Sorge JA, Mathur EJ (1991) High-fidelity amplification using a thermostable DNA polymerase isolated from Pyrococcus furiosus.Gene 108:16[2] Ppyun H, Kim I, Cho SS, Seo KJ, Yoon K, Kwon S (2012) Improved PCR performance using mutant Tpa-S DNA polymerases from the hyperthermophilic archaeon Thermococcus pacificus. J Biotechnol 164:363370[3]Cline J, Braman JC, Hogrefe HH (1996) PCR fidelity of Pfu DNApolymerase and other thermostable DNA polymerases. NucleicAcids Res 24:35463551[4]吴海洪, 孙章辉, 蔡谨. 乳糖诱导 Pfu DNA 聚合酶基因的表达及酶的纯化[J].科技通报.2008,24(1):23-8.[5]Dabrowski S, Kur J. Cloning and expression in Escherichia coli of the recombinant his-tagged DNA polymerases from Pyrococcus furiosus and Pyrococcus woesei.[J]. Protein Expression Purification, 1998, 14(1):131-8[6]潘耀谦, 金春彬. 聚合酶链反应 (PCR) 技术体系研究进展[J].动物医学进展.1999,20(4):11-7.[7]贾平. 高纯度Taq DNA聚合酶制备技术研究[D].南京理工大学,2013.[8]孙章辉. 重组大肠杆菌 DNA 聚合酶的提取及纯化研究[J].浙江大学学报.2006,25(1):19-21.[9]赵瑞香,王大红,牛生洋,苏娟. 超声波细胞破碎法检测嗜酸乳杆菌β-半乳糖苷酶活力的研究[J]. 食品科学,2006,(01):47-50.[10]丁亦男,聂洪峰. 溶菌酶的应用进展[J]. 长春师范学院学报(人文社会科学版),2009,(12):46-47.[11]周昭. 重组人KGF-1蛋白的表达、纯化及活性研究[D].安徽大学,2015.[12]代龙军,项秋兰,黎瑜,聂智毅,康桂娟,段翠芳,曾日中. 巴西橡胶树橡胶粒子蛋白质的16-BAC/SDS-PAGE双向电泳及质谱分析[J]. 中国农业科学,2012,(11):2328-2338.[13]唐威华,张景六,王宗阳,洪孟民. SDS-PAGE 法测定His-tag 融合蛋白分子量产生偏差的原因[J]. 植物生理学报,2000,(01):65-69.