1.大田不同浓度O的设置

利用开顶式气室(OTC)内O3浓度增加对冬小麦的影响，设置9个开顶式气室分属3个处理组，每处理设置3个重复。小麦返青期前开始通O3曝气处理，灌浆期停止曝气，曝气时段为每日8:00- 16:00,共8h。实验设置3个处理:(1)CK处理,通未经处理的空气;(2)CF100处理,气室内O3浓度为100nL/L;(3)CF150处理,气室内O3浓度为150nL/L。同时,开顶式气室内放置一台自动气象站,用于连续监测其空气温度、湿度以及太阳辐射等

2.大田小麦的种植

试验点在南京信息工程大学生态与农业气象试验站 土培种植的小麦 土壤为潮土,质地均匀细腻,肥力中等 供试作物为冬小麦为当地主栽品种。

3. 小麦根际土壤取样

根际土壤是附着在根周围的土壤，取样的时候是直接将小麦连根拔起，抖掉根周围松散的土壤，剩下的是根际土。利用五点采样法采集根际土壤。

4. 细菌、真菌、放线菌数量的测定

细菌采用牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；真菌采用改良的高氏一号培养基；真菌采用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）培养基

5. 磷脂脂肪酸（PLFA）的分离和分析

PLFA（磷脂脂肪酸）常被用于研究复杂群落中微生物的多样性[17]，表征在数量上占优势的土壤微生物群落，包括不可培养微生物。磷脂是所有活细胞的细胞膜的基本组分，而PLFA是磷脂的组分，其具有结构多样性和高的生物学特异性，因此，PLFA谱中某些特征脂肪酸分别对细菌、真菌和放线菌特异，是特别有效的生物标记物，可用于了解微生物群落结构。PLFA的提取主要采用简单提取、扩展提取和商用微生物鉴定系统(MIDI)提取等方法。

6. 微生物群落PLFA标记分析与含量计算

不同的PLFA标记特定的微生物。

预期效果：臭氧浓度增加，土壤中细菌、真菌和放线菌数量会发生较为明显的改变。小麦根际土壤的微生物群落结构会发生变化，土壤的肥力会下降。