1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述

土壤是各种微生物良好的栖息环境，生存着许多具有相互拮抗作用的微生物。利用植株根际土壤中拮抗的细菌或其代谢产物调控根周围有害微生物的平衡以达到控病保产的目的，是土传病害防治的重要途径，筛选高效和活性稳定的拮抗菌株则是保证生物防治获得成功的先决条件。芽孢杆菌是自然界广泛存在的一类细菌，一些菌株可以产生杆菌肽、大环脂、环脂、和类噬菌体颗粒等十几种抗菌物质，在植物病害生物防治中被广泛使用。同时芽孢杆菌作为革兰氏阳性菌，可以形成芽孢，细胞壁不含内毒素，除个别种外绝大多数对人畜无害，因此具有很强的环境适应性和环境友好性。

芽孢杆菌种群庞大，繁殖能力强，耐热、耐酸碱、理化性质稳定，抑菌谱广泛，为目前主要的生防菌株。生防芽孢杆菌主要有枯草芽孢杆菌( bacillus subtilis ) 、解淀粉芽孢杆菌( bacillusamyloliquefaciens) 、多粘芽孢杆菌( bacillus polymyxa)、蜡状芽孢杆菌( bacillus cereus) 、地衣芽孢杆菌( bacillus licheniformis) 、巨大芽孢杆菌( bacillusmegaterium) 和短小芽孢杆菌( bacillus pumilis) 等。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1本课题研究目的利用植株根际土壤中拮抗的细菌或其代谢产物调控根周围有害微生物的平衡以达到控病保产的目的，是土传病害防治的重要途径，筛选高效和活性稳定的拮抗菌株则是保证生物防治获得成功的先决条件。植物病害多由病原真菌所引起，利用拮抗菌的生防机制来控制植物病害既高效又环保，具有广阔的空间。随着人们对无公害食品的需求的日益增加以及对环境保护的日益关注，生物防治成为了人们控制植物病害的理想途径。因此，筛选出生物活性高、抗菌谱广的菌株具有重要的意义。目前国内外对番茄、大蒜、黄瓜等植物生物防治的研究已经取得了较大的进展。本研究从芽孢杆菌中进行光谱拮抗芽孢筛选，对其进行生理生化、16S rDNA序列鉴定，并对其防治效果进行了初步探讨，以期为开发出具有应用价值的生防菌剂奠定基础。 2.2本课题的主要研究内容 本课题是从芽孢杆菌中进行光谱拮抗芽孢筛选 ，测定其所产抗菌物质的抑菌谱。结合形态学观察、生理生化鉴定以及16SrDNA同源性分析，对筛选获得的拮抗芽孢杆菌进行鉴定，测定其理化性质稳定性。 (1)不同菌株菌落培养性状表。 (2)芽孢杆菌对植物病原菌的拮抗作用图。 (3)芽孢杆菌的发酵液对植物病原菌的抑制率。 (4)筛选获得的芽孢杆菌的生理生化特征表。 2.3实验中拟采用的研究手段取土壤样品（5 g）→放入三角瓶中→混匀→加95 ml蒸馏水→摇匀→取上清液l ml→到9 ml无菌水中→稀释→涂布于37℃营养琼脂培养基→混匀→恒温培养 1 d→菌落计数→挑选菌落形态差异比较明显的菌落→重复划线→接种于相应的琼脂平板上→直至纯化得到单菌落→挑取产生抑菌圈的菌落→纯化→选取指示菌→对抑菌物质成分进行鉴定→利用通用引物27f、1492r扩增纯化后的菌液→进行PCR产物测序→测序结果在GenBank中比对→绘制菌株生理生化特征图→绘制描述菌株形态的特征表→用现有的分类标准对菌株进行分类。 各菌株细胞个体形态观察平板培养1d后的菌落形态观察结果制作表格进行描述。 筛选出具有拮抗作用的芽孢杆菌进行观察分析并绘制相关表格：（1）不同菌株菌落培养性状表。（2）芽孢杆菌对植物病原菌的拮抗作用图。（3）芽孢杆菌的发酵液对植物病原菌的抑制率。 （4）筛选获得的芽孢杆菌的生理生化特征表。