#160;#160;#160; 一、研究背景

目前已经鉴定出17种类泛素蛋白（ubiyuitin-likeprotein UBLs,），这些蛋白与底物的结合方式与泛素相似．根据进化特征，可将UBLs分为9类，分别为：NEDD8、SUMO、ISG15、FUB1、FAT10、Atg8、Atg12、Urm和UFM^[1].。NEDD8是目前研究最多的UBLs之一，与泛素的氨基酸序列具有高度相似性．NEDD化修饰是一种动态的可逆蛋白质翻译后修饰方式，可以将NEDD8 共价结合到靶蛋白之上，也可以将NEDD8从靶蛋白上去除,NEDD化修饰对蛋白功能具有重要的调节作用，如改变蛋白质的空间构象、阻碍底物与其它蛋白质的相互作用和招募与NEDD8相互作用的蛋白等．最新研究表明，NEDD化与肿瘤的发生发展密切相关，但具体的机制还不清楚^[2]．

泛素-蛋白酶体复合物通路（ubiquitin-proteasome pathway,UPP）是Hershko等在20世纪末发现的1种高效蛋白质降解通路，该通路通过蛋白酶体选择性降解细胞内泛素化的蛋白质，不但能够破坏损失陈旧的蛋白质，而且能够参与调节细胞的多种重要生命过程，精确降解细胞内各种目的靶蛋白，进而参与基因转录，细胞周期调节，以及受体胞吞、抗原呈递等各种细胞生理过程，UPP的发现被认为是细胞周期、细胞恶化转化和免疫学研究的转折点^[3]。

二.泛素蛋白酶体通路

泛素是一种在真核生物中普遍存在的由 76 个氨基酸组成的小蛋白，通过激活酶(E1)，结合酶(E2)以及连接酶(E3)的催化作用，泛素分子被共价连接到靶蛋白的赖氨酸残基上，并被26S 蛋白酶体识别，介导蛋白质降解^[4]。泛素化（ubiguitination）是一种重要的蛋白质翻译后修饰方式，可以调节真核细胞的多种生理功能,泛素蛋白可以共价结合到其靶蛋白上，调节靶蛋白的功能及与其它蛋白质的相互作用．除了泛素化之外，几种相关的蛋白质翻译后修饰系统也在真核生物中发挥作用^[5]．其中，NEDD8是一种与泛素最为 接近的蛋白，与泛素约有60％的氨基酸序列相似性和80％的同源性．NEDD8也叫做Rub1^[6]，在绝大多数真核生物中广泛表达，高度保守，这说明NEDD8对细胞功能的调控具有重要的作用。NEDD8通过一种称为NEDD化的过程与底物蛋白相结合。NEDD表达调控过程中发挥重要作用的蛋白质，包括转录因子和转录辅因子等，说明这种蛋白质修饰方式在基因的转录调控过程中发挥重要作用，与肿瘤的发生发展密切相关^[7]．

#160;#160;#160;#160; 三 、NEDD化级联系统

1.NEDD化

它是一种与泛素化类似的蛋白质翻译后修饰方式，可将NEDD8共价可逆地结合到靶蛋白上，该过程需要一系列酶参与反应，如E1激活酶、E2结合酶、E3连接酶和去NEDD化酶等．首先，在去NEDD化酶的作用下，NEDD8前体保守的Ｃ末端76位点甘氨酸肽键水解，暴露出双甘氨酸基序，此基序可作为NEDD8与底物连接的基序。在ATP存 在的情况下，NEDD8通过硫酯键与E1激活酶的半胱氨酸侧链相连．激活的NEDD8再转移到E2结合酶之上，形成另1个硫酯键．最后在E3连接酶的作用下，NEDD8通过异肽键与底物蛋白的赖氨酰残基结合^[8]。

泛素链与底物蛋白的连接方式对底物功能具有重要的调节作用．而目前对NEDD8链功能的研究还很少。质谱分析表明，在体内NEDD8蛋白的K11，K22，K48和K60位点可以形成NEDD8链．体外研究表明，NEDD8首先在Ubc１２的半胱氨酸残基上 形成多聚链，然后在E3连接酶ROC1的作用下，多聚NEDD8链从 Ubc12转移到底物蛋白 Cullin-1上．NEDD还可以直接连到泛素链上，但目前对于泛素-NEDD8混合链的研究很少，其功能也不清楚。NEDD化是一个可逆的过程．COP信号小体（COP9 signalosome,CSN）是一种锌金属蛋白酶，也是目前研究最广泛的去NEDD化酶^[9]．CSN由８个亚基组成，其中CSN5亚基具有催化活性．NEDP1是另外一种NEDD8特异性蛋白酶．与CSN相比，其去 NEDD化的能力较弱^[10].

2.NEDD 化的功能