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摘 要

阿比特龙是一种全源的CYP17酶抑制剂，能够全面抑制前列腺癌病患体内雄激素的合成，有良好的治疗效果。本研究开发并验证一种准确灵敏的液质联用检测方法，为今后全面评价人体内阿比特龙的临床药代动力学研究打下良好的基础。

通过乙酸乙酯液液萃取的方法来提取比格犬血浆中的阿比特龙，选择的内标为阿比特龙-d4。色谱分离按照等度洗脱的方法以0.3ml·min^-1的流速在 XB-C18 柱上完成，选择乙腈-水和含有0.5‰甲酸溶液作为流动相。在使用液质联用对比格犬血浆中的阿比特龙的含量进行检测时，采用ESI源和MRM正离子检测模式。阿比特龙检测离子对为m/z 350.0→334.4、阿比特龙-d4检测离子对为m/z 354.0→160.0；离子喷雾电压5000V。

标准曲线的浓度范围是1–1000 ng/mL（阿比特龙），定量下限为1 ng/mL。阿比特龙的比格犬血浆提取回收率大于60%，批内、批间RSD值均低于百分之十五，RE在-1.693%到3.181%之间。比格犬血浆中待测物阿比特龙的LC-MS/MS检测方法具有很大优势，其专属性强、灵敏度高、快速准确，适用于阿比特龙在比格犬中血药浓度检测，为药物的动物体内实验研究提供技术基础

关键字：阿比特龙 体内药物分析 LC-MS/MS 方法学验证

Bioanalytical quantitative method validation for Abitrone in Beagle dog plasma

Abstract

As an irreversible, highly selective and high-affinity CYP17 enzyme inhibitor, Abiraterone can completely inhibit the synthesis of androgen in prostate cancer patients and has a good therapeutic effect. This study developed and validated an accurate and sensitive LC/MS detection method, which laid a good foundation for the comprehensive evaluation of the clinical pharmacokinetics of abiraterone in human body.

Ethyl acetate was selected as the extracting agent to extract Abiraterone and the internal standard in the Beagle dog plasma. Abiraterone-d4 was chosen as the internal standard. The chromatographic separation was carried out by isocratic elution on a XB-C18 column at a flow rate of 0.3 ml·min-1. The mobile phase was made up of two phases including acetonitrile and water (a solution containing 0.5‰ of formic acid). The ESI source and MRM positive ion detection mode were used during the detection of Abiraterone in dog plasma. The detection ion pair for Abiraterone was m/z 350.0→334.4, the ion pair for Abiraterone-d4 detection was m/z 354.0→160.0; the ion spray voltage was 5000V.

The range of the caliberation curve was set at the concentrations from 1 to 1000 ng/mL (Abiraterone) and the lower limit of quantitation is 1ng/mL. The plasma extraction recovery rate of Abiton's Beagle dogs is greater than 60%. The intra- and inter-assay RSD values ​​are less than 15%, and RE is between -1.693% and 3.181%. The LC-MS/MS detection method of the testin in the plasma of Beagle has great advantages. It has strong specificity, high sensitivity, fast and accurate, and is suitable for the detection of blood concentration of abiraterone in Beagle dogs. Provide technical basis for in vivo experimental research of drugs in animals

Keywords: Abiraterone; LC-MS/MS; Bioanalytical method validat

目 录

摘 要 I

Abstract II

第一章 文献综述 1

1.1前列腺癌(prostatic cancer， PCa) 1

1.1.1 PCa的简介 1

1.1.2 转移性去势抵抗性前列腺癌（mCRPC） 1

1.2 阿比特龙 2

1.2.1阿比特龙的合成及简介 2

1.2.2 阿比特龙的作用机制 3

1.2.3 阿比特龙的不良反应 4

1.3检测方法 5

第二章 实验材料和方法 6

2.1实验仪器 6

2.2 实验试剂 6

2.3 实验条件与方法 6

2.3.1 液相色谱条件 6

2.3.2 质谱条件 6

2.4 对照品、内标、质控（QC）标准溶液的配制 8

2.5 血浆样品前处理 9

2.6 标准曲线的制备 9

2.7 质控（QC）样品的制备 9

2.8 方法验证 9

2.8.1 特异性 9

2.8.2 标准曲线的制备及定量下限的测定 9

2.8.3 提取回收率与基质效应 9

2.8.4 精密度(RSD%)和准确度(RE%) 10

2.8.5 稳定性 10

2.8.6残留效应 10

第三章 实验结果与讨论 11

3.1 质谱条件的优化 11

3.2 色谱条件的优化 11

3.3 提取方法的选择 12

3.4 定量上限的选择 12

3.5 方法学验证 12

3.5.1方法的专属性 12

3.5.2标准曲线 15

3.5.3 提取回收率与基质效应 16

3.5.4精密度与准确度（Pamp;A） 17

3.5.5 稳定性 18

3.5.6 残留效应 18

第四章 结论与展望 20

参考文献 21

致谢 24

第一章 文献综述

1.1前列腺癌(prostatic cancer， PCa)

1.1.1 PCa的简介

前列腺癌以其极高的发病和死亡率，主要见于西方国家的男性人群，成为威胁男性生命和健康的癌症之一。2012年的世界癌症趋势分析报告显示，在男性所有肿瘤中，PCa新发病例的比例为 17%，死亡病例更是占到8%，分别以新发病例的第 2 位和死亡病例的第 5位占据高位^[1]。在一些发达国家和地区，PCa更是危害到老年男性的生命健康。以北美为例，2016年的PCa预测新发病例高达180890例，其中80%的临床前列腺癌患者年龄在65岁以上，预测死亡率仅次于肺癌^[2]。

中国是前列腺癌发病及死亡较低的国家之一，但近年来，因为人们生活饮食习惯发生了改变，前列腺癌特异抗原 ( prostate cancer specific antigen，PSA) 筛查技术开始不断普及，环境污染也不断加重，癌症的诊疗技术正在不断提高，PCa在中国的发病率越来越高，且呈现持续攀升的趋势，已成为我国男性生殖系统中发病率最高的肿瘤^[3]。PCa越来越危害到人类的健康与生命，其治疗也越来越引起人们的关注与重视。

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