论文总字数：14769字

摘 要

目的：在这项研究中，建立合适的HPLC方法来测定其含量。方法：仪器：戴安U300高效液相色谱仪；这这项实验中，以Nova-Pak®Silica柱（150mm×3.9mm，4μm）为色谱柱，紫外检测波长为254纳米，流速为2ml/min；以体积比为997:3的正己烷-正戊醇为流动相，每次进样100μl.。本次实验过程中进行了一系列的方法学研究。结果：麦角甾醇在2.516-7.548μg·mL-1内线性关系良好（r=0.9996），线性方程为y=0.4446x-0.1471；麦角甾醇的回收率为97.9%，符合要求。麦角甾醇对照品溶液的稳定性符合规定，耐用性等均符合要求。结论：该实验在操作上具有可行性、溶液配制简便、实验过程耗时较短，结果准确可靠。

关键词：高效液相色谱法 维生素D2 麦角甾醇 方法学研究 含量测定

Abstract

objective: In this study, a suitable HPLC method was established. methods: Instrument: Agilent 1260-DAD; Chromatographic column: Nova-Pak®Silica（150mm×3.9mm，4μm） mobile phase: n-hexane-n-pentanol (997:3); UV detection wavelength 254 nm; flow rate 2 ml/min; injection volume 100 μl. In the following experimental processes, a series of methodological studies were carried out. Results: the linear equation of ergosterol was y=0.4446x-0.1471, r=0.9996. The recovery of ergosterol was 97.9%. The stability and durability of ergosterol reference solution meet the requirements. conclusion: The experiment is feasible in operation, easy to prepare solution, short time-consuming in experiment process and accurate and reliable in result.

Key words: High Performance Liquid Chromatography Vitamin D2 Ergosterol Methodological study Determination of content

目录

摘 要 1

Abstract 2

第一章 文献综述 4

1.1维生素D2 4

1.1.1维生素D2的化学式 4

1.1.2维生素D2合成方法 5

1.2麦角甾醇 5

1.2.1麦角甾醇基本信息 6

1.2.2麦角甾醇的合成 6

1.3麦角甾醇和维生素D2常用提取方法 6

1.4维生素D2和麦角甾醇常用定量检测方法 7

1.5维生素D2中麦角甾醇的含量测定 8

1.6研究依据与目的 8

第二章 维生素D2中麦角甾醇的含量测定 10

2.1仪器与试剂 10

2.1.1 仪器设备 10

2.1.2 试剂 10

2.1.3 样品 11

2.2测定方法 11

2.2.1溶液的配置 11

2.2.2色谱条件 11

2.3方法学研究 12

2.3.1专属性实验 12

2.3.2线性关系研究以及校正因子 12

2.3.3准确度实验 14

2.3.4稳定性试验 14

2.3.5耐用性实验 15

2.4含量测定 16

2.5讨论 17

2.6小结 18

第三章 结论与展望 19

3.1结论 19

3.2展望 19

参考文献 21

致谢 24

文献综述

1.1维生素D2

维生素D2的颜色和形状为白色粉末（呈结晶性）。虽然在水中不易溶解,但却极易溶于氯仿，并且在乙醇、丙酮和乙醚中溶解度也比较良好。无臭,无味, 性质稳定,在密闭贮藏时不易变质,但是当暴露在空气中或暴露在阳光下时则易变质,维生素D2对光线、热和氧气敏感,并且可生成多种具有相似化学性质的异构体。维生素D2是一种开环的类固醇，可由光化学反应中的类固醇化学键裂解形成，特别是紫外线和麦角甾醇。维生素D还具有广泛的生物学效应，然而缺乏维生素Ｄ可以导致小儿佝偻病及成人软骨病外，还与代谢综合征、心脑血管疾病、自身免疫疾病、癌症和感染等相关联[1]。一项研究表明钙平衡的重要生物调节因子之一[2]。在人的身体当中，一项不可或缺的营养素被称为维生素D2，它具有重大生理作用，在吸收和代谢过程中扮演者重要的角色。目前，维生素D受体不仅存在于与钙代谢直接有关的器官中如小肠，骨骼和肾脏，还存在于胸腺、淋巴细胞等地方。科学研究表明，维生素D不仅可以调节钙、磷的代谢,还能参与细胞增殖、分化和免疫系统的调节,并且在许多疾病发生和进展过程中扮演着至关重要的角色[2]。近年来研究发现: 维生素D水平与免疫功能、糖尿病、神经系统疾病、心血管疾病、肿瘤、肝脏疾病、妇科疾病等密切相关, 缺乏维生素D或可导致多种慢性疾病的发生和发展[2]。我国的维生素 D2虽然已初步实现了工业化,然而总体上生产水平扔较低,并且成本相对比较高,难以满足社会需要[3]，因此多数只能从国外进口以满足国内的需求。目前，维生素D2的生产主要来源于经紫外线照射的麦角甾醇来获得。目前在民众的日常生活中，日常的食物是维生素D2的一项重要来源，然而富含维生素D2的食物却是及其有限的，仅存在于如黄油、深海鱼等极个别的动物产品，而植物中则罕有涉及。后来，食用菌中也被发现含有维生素D2，但其形式很难被人体直接吸收，只有经过特殊的处理如紫外线照射才能加以利用。

1.1.1维生素D2的化学式

图1 化学式

储存条件：2-8℃

1.1.2维生素D2合成方法

光化学法和热化学法为维生素D2的重要合成方法[22]。由热化学反应法进行合成维生素D2需要经过20多步的反应[20]。20世纪30年代初，科学家们提出新光化学法合成维生素D2，即令麦角甾醇通过紫外线照射来获得维生素D2[20]。科学家们就已经提出了从麦角固醇出发,利用光化学方法合成维生素D2的路线，麦角固醇光照得到维生素D2的过程相对简单,但产生多个复杂的副产物，给VD2的分离提纯造成极大困难[20]。另外,维生素D2以及中间体对光照、温度、空气都很敏感[20].并且不同波长的光照对其转化影响亦不同。因此在合成中需要严格控制各项反应条件。

1.2麦角甾醇

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