1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述

罗丹明B，又叫玫瑰B、碱性玫瑰精、蕊香B，俗称花粉红。它是一种人工合成的碱性荧光染料，通常应用它的氯化物。主要用于造纸工业染蜡光纸、打字纸、有光纸等，与磷钨钼酸作用生成色淀，用于制造油漆、图画等颜料、也可用于腈纶、麻、蚕丝等织物以及麦秆、皮革制品的染色；同时它也是一种常见的分析试剂，广泛应用于环保、矿业、钢铁、医药等领域，也可作实验室中细胞荧光染色剂。曾用作食品添加剂，但实验证明罗丹明B会致癌，现已不允许用作食品添加剂及食品染色^[1]。但由于罗丹明B具有价格低廉、色泽红艳、稳定性强等特点，常被不法商家用作替代食品添加剂的着色剂，给人们的饮食安全带来极大隐患。根据相关文献报道主要有高效液相色谱荧光检测法^[2,3]；高效液相色谱串联质谱检测法^[4-9]、高效液相色谱紫外检测法^[10]等。2010年国家质量监督检验检疫总局发布行业标准SN/T2430-2010《进出口食品中罗丹明B的检测方法》，适用于腊鱼、腊肉香肠、果汁、果酱、辣椒粉、辣椒油、糖果、话梅、葱头及饼干中罗丹明B的测定和确证^[11]。本研究拟采用高效液相色谱串联质谱技术测定辣椒中的罗丹明B。方法是用乙酸乙酯-环己烷提取试样中的罗丹明B，经凝胶色谱净化系统净化，用液相色谱液相色谱质谱/质谱仪测定和确证，外标峰面积法定量。近年来在食品中违法添加罗丹明B的情况常有发生，因此加强罗丹明B的监督管理对保护消费者的身体健康有着十分重要的意义。

1.1 罗丹明B的理化性质与用途

1.1.1 罗丹明B的理化性质

罗丹明B的化学式是C₂₈H₃₁N₂O₃Cl，结构式如图1所示，分子量为479.01，熔点为210~211℃。水溶液为蓝红色，稀释后有强烈荧光，常温下为绿色结晶或红紫色粉末，几乎无异味，易溶于水、乙醇，微溶于丙酮、氯仿、盐酸和氢氧化钠溶液。于浓硫酸中呈黄光棕色，带有较强的绿色荧光，稀释后呈猩红色，随后变为蓝光红色至橙色。醇溶液为红色荧光，最大吸收波长552nm，最大荧光波长610nm，激光峰值波长610nm，调谐范围578~610nm，要在密封阴凉干燥保存。

1.1.2 罗丹明B的用途

罗丹明B主要用于造纸、制漆、纺织、皮革和瓷器的工业染色；罗丹明B用于比色测定镉，光度测定金、镓、汞、锑(Ⅴ)、铊(Ⅲ)；罗丹明B用于荧光测定锰、钴等；罗丹明B作为氧化还原指示剂来滴定锡、锑、铌、钽的沉淀剂；罗丹明B作为生物染色剂和系列激光染料；罗丹明B用作薄层色谱法测定类脂质的显色剂；罗丹明B在化妆品工业中,可用于浴液、洗发水、冷烫水等类产品的着色,但不得用于眼部、口腔及唇部化妆品中。

1.2 罗丹明B的危害

罗丹明B不能用作食品添加剂^[12-15]，其主要原因不仅仅是它属于人工合成染料，根据国际癌症研究署(IARC)化学品致癌风险评价表明：摄取、吸入以及皮肤接触该物质均会造成急性和慢性的中毒伤害。虽然在2008年，罗丹明B已被全国打击违法添加非食用物质和滥用食品添加剂专项整治领导小组，列入第一批《食品中可能违法添加的非食用物质和易滥用的食品添加剂名单》，欧盟等国家也都不允许在食品中使用。但是由于罗丹明B价格低且着色效果好，常被不法商贩作为添加剂添加到食品中去。近年来违法添加罗丹明B的事件屡屡发生^[16]。2011年2月15日，”重庆千骄调味品有限公司”厂区内部分残留豆瓣酱和红油中查出罗丹明B。2011年3月25日，重庆市九龙坡区质监局从重庆火锅研究所食品生产基地送检的某品牌火锅底料、麻辣鱼底料中，检验出均含有害物质”罗丹明B”。2011年4月底重庆警方查获上万斤罗丹明B染色的毒花椒，这些花椒部被不法商贩用来制成火锅底料；与此同时，北京市场也发现有类似的染色花椒出售。

1.3 高效液相色谱-串联质谱（HPLC-MS/MS）技术

1.3.1 HPLC-MS/MS简介

液相色谱-质谱联用技术以液相色谱作为分离系统，质谱作为检测系统，经钝化后的样品在液相色谱和质谱部分经过分离和离子化，通过检测器得到质谱图。色谱的优势在于分离，为混合物的分离提供了最有效的选择，但其难以得到物质的结构信息，主要依靠与标准物对比来判断未知物，对无紫外吸收化合物的检测还要通过其它途径进行分析。质谱能够提供物质的结构信息，用样量也非常少，但其分析的样品需要进行纯化，具有一定的纯度之后才可以直接进行分析。液质联用体现了色谱和质谱优势的互补，将色谱对复杂样品的高分离能力，与质谱具有高选择性、高灵敏度及能够提供相对分子质量与结构信息的优点结合起来，在药物分析、食品分析和环境分析等许多领域得到了广泛的应用。高效液相色谱是一种准确度高，分离范围广的快速分离方法，它对化合物的结构破坏性小，适合有机分子和生物分子的分离。质谱具有其他分析方法无可比拟的灵敏度，对于未知化合物的结构分析定性十分准确，对相应的标准样品要求也比较低。质谱可以和气相联用如GC-MS，也可以和高效液相色谱联用如HPLC-MS。由于色谱和质谱灵敏度相当，再加上分离效果很好的色谱可以作为质谱的进样系统，质谱作为色谱的鉴定仪速度快，分离好，应用广。色谱-质谱联用成为最好的用于分析微量有机混合物的仪器。液相色谱-质谱（LC-MS）虽然有足够的灵敏度，但遇到LC难以分离的组分时，应用会受到限制。使用液相二级质谱联用(LC-MS/MS)可以克服背景干扰的问题,二级质谱（MS/MS）可选择反应控制模式（SRM）或多反应检测模式（MRM），提高信噪比，因此对复杂样品的测定仍然可以达到很高的灵敏度。

液相色谱-串联质谱仪的特点：具有效率高的优点，快速、灵敏度高的特点，选择性高，分离度高，定性定量准确，是一种纯物质分析的有效手段，既能满足未知物质的定性需求，也能满足有效的定量分析的需求要，集高效分离和结构鉴定于一体。

1.3.2 HPLC-MS/MS的应用

高效液相色串联质谱系统主要通过分析物质的分子量及元素组成等研究分子的结构等方面的信息。在生物，医药，农业，化学，精细化工等方面均可应用：

蛋白质和多肽的研究（蛋白的分子量测定及序列分析，肽谱测定，巯基及二硫键定位，酸化、糖基化或化学修饰位点的确认等）；寡核苷酸和核酸的分析；多糖的结构的研究；中药活性组分和其他天然产物的分析、鉴定；药物代谢产物的分析；食品添加剂的分析及农药残留测定等。

近年来，HPLC-MS/MS被广泛应用于食品安全检测方面，农兽药在食品中的残留、食品中违禁物质和有害添加剂的检测^[17]、功能性成分在保健品中的检测等方面起着重要的作用，在规范食品生产、控制食品质量、保障食品安全等方面提供了有效的分析测定方法，该技术在食品分析检验方面具有十分广阔的前景。

参考文献

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2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一、研究罗丹明b对人体的危害。

二、采用高效液相色谱串联质谱法测定罗丹明b。

三、研究罗丹明b在检测过程中受哪些因素影响。