摘 要

京尼平苷是一种环烯醚萜类化合物，环烯醚萜苷类化合物分子量一般较小，大部分都有着极性官能团，偏亲水性，更加容易溶解在水、甲醇，可以溶解在乙醇、丙酮与正丁醇之中，但是难溶于氯仿、乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。萜类化合物由于具有显著的生物活性，所以成为了功能性食品和新的治疗使用过程中最有希望的候选者，但是由于其自身所存在的低稳定性和溶解度等问题，一些生物活性植物化合物只能在有限的条件之下得到利用。京尼平苷极性大，脂溶性差，提取工艺产率较低，难以有效分离和应用，极大地限制了京尼平苷的广泛应用。本文通过使用五种脂肪酶CAL-B、CAL-A、RMIM、诺维信435和TLIM分别来对京尼平苷进行催化酰化实验，发现TLIM催化后有可能得到目标产物，通过质谱和C₁₈柱纯化确定目标产物存在，并预测了产物结构。本文通过酶法修饰的方法去获得脂溶性好的京尼平苷衍生物，并提高其生物活性，使得应用更加广泛。

关键词：京尼平苷 脂肪酶 酰化 脂溶性

Enzymatic Modification of the Geniposide

Abstract

Geniposide is a kind of iridoid glycosides compounds which generally have very small molecular weight.Most of the iridoid glycosides compounds have a polar functional groups, partial hydrophilic and are more easily dissolved in water, methanol.They can also be dissolved in ehanol, acetone and butanol.But iridoid glycosides compounds are difficult to dissolve in the lipophilic organic solvents such as chloroform, ether, benzene etc.Flavonoids are promising candidates for use as functional foods and novel therapeutics due to their prominent biological activities.However,the use of several bioactive plant compounds is limited by low stability and fat-solubility problems.Geniposide has great polarity and poor fat solubility.It also has very low extraction process yield and is difficult to be efficiently separated and applicated.All of these restricte the wide application of geniposide.In this paper, we used five lipases: CAL-B, CAL-A, RMIM, Novozymes 435 and TLIM respectively to catalytic acylation experiment of geniposide.It was found that the target product can be obtained after TLIM’s catalytic reaction.The presence of the target product was determined by mass spectrometry and C₁₈ column purification.Then,we predicted the structure of the product.In this paper，we hope to get through enzymatic modification method to obtain fat-soluble good geniposidic derivatives and to increase its biological activity, making the application more widely.

Key words: Geniposide, Lispase, Biocatalytic acetylation, Fat-solubility

目 录

摘要 I

Abstract II

第一章 绪论 1

1.1 京尼平苷的性质和应用 1

1.1.1 京尼平苷的来源和理化性质 1

1.1.2 京尼平苷的应用 1

1.2 天然产物的结构修饰 2

1.2.1 天然产物结构修饰的必要性 2

1.2.2 天然产物结构修饰的研究现状 4

1.3 课题研究背景和意义 5

1.4 课题主要研究内容 5

第二章 材料与方法 6

2.1 材料仪器 6

2.1.1 实验试剂 6

2.1.2 实验仪器 6

2.2 实验方法 6

2.2.1 固定化脂肪酶酶活测定方法 6

2.2.2 脂肪酶耐有机溶剂性能的测定 7

2.2.3 高效液相色谱法测定京尼平苷 8

2.2.4 酶催化酰化反应体系及条件 8

2.2.5 目标产物的纯化 8

第三章 结果与讨论 10

3.1 脂肪酶的酶活和耐有机溶剂性能的测定 10

3.1.1 对硝基苯酚标准曲线的制作 10

3.1.2 耐有机溶剂性能的测定 10

3.2 京尼平苷标准品的标准曲线 11

3.3 酶催化产物的液相检测 12

3.4 酶催化反应产物的质谱检测 14

3.4.1 反应产物的质谱检测 14

3.4.2 反应产物的结构预测 17

第四章 结论与展望 19

4.1 结论 19

4.2 展望 19

参考文献 20

致谢 22

第一章 绪论

1.1 京尼平苷的性质和应用

1.1.1 京尼平苷的来源和理化性质

京尼平苷是一种环烯醚萜葡萄糖苷物质，植物界之中广泛存在着环烯醚萜类化合物一类的单萜物质，它们大多会按照糖苷的形式所存在着，不单单在植物分类学方面发挥着举足轻重的作用，还体现了极为丰富的生物活性。京尼平苷的基本结构如图1-1所示，它的分子式是C₁₇H₂₄O₁₀，无毒，易溶于水，京尼平苷对α-萘酚、羟肟酸、三氯化铁呈正反应，是一种白色结晶。京尼平苷的熔点为161-162℃，在常压之下它的沸点是641.1℃。

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