新型甘露糖-6-磷酸异构酶的挖掘与L-核糖的酶法制备开题报告
2020-05-15 21:59:53
1. 研究目的与意义(文献综述包含参考文献)
文 献 综 述
1.1 背景介绍
磷酸甘露糖异构酶(phosphomannose isomerase,pmi 或 mannose-6-phosphate isomerase ,mpi;ec 5.3.1.8)可逆催化生物体内果糖-6-磷酸(f-6-p)和甘露糖-6-磷酸(m-6-p)之间的相互转化,该酶是一种依赖于金属离子的金属酶[1].
随着基因工程技术的迅速发展,利用分子克隆和外源表达技术可以大幅度地提高某种工业酶在宿主微生物中的表达量,通过这种方法构建的基因工程菌株具有普通微生物难以企及的酶催化效率;利用共表达基因重组菌生产l-核糖的工艺在国内尚没有报道,本发明选择自筛的发酵乳杆菌和嗜热栖热菌作为分子生物学操作的出发菌株,通过pcr技术从该菌株的基因组上扩增得到了l-阿拉伯糖异构酶的编码基因araa和甘露糖-6-磷酸异构酶(pmi) 的编码基因mana,利用大肠杆菌作为宿主,成功构建了能够高效共表达l-阿拉伯糖异构酶和甘露糖-6-磷酸异构酶的基因工程菌。
2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案
2.1研究内容 (1 1、PCR,蛋白质表达,SDS-PAGE,测酶活,这几个实验 2.2研究手段 2.2.1实验材料 L-核糖 阿拉伯糖 大肠杆菌 2.2.2实验方法 化学合成法 由糖类物质生物转化制备L-核糖 生物转化的催化酶 L-核糖的分离纯化 2.2.3 PCR反应 PCR作为分子生物学领域的前沿技术,目前已经在国际上获得广泛的认可,并普遍应用于食品致病菌的快速检测。
2.2.4 电泳 通过分析电泳结果,选取最佳提取方法