1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

随着经济快速发展,大气污染和全球变暖的趋势日益恶化。

世界上每年消耗大量石化资源来合成聚酰胺,戊二胺作为聚酰胺的重要组成单体,生物法合成戊二胺具有经济学和生态学双重意义。

戊二胺(diaminopentane) ，又名尸胺 (cadaverine)、1,5-二氨基戊烷、五亚甲基二胺或尸 毒素，是生物胺类 (包括腐胺、精胺、亚精胺和尸 胺等) 中的一种。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

研究目的：构建能够一步发酵产1,5-戊二胺的重组大肠杆菌，并利用基因编辑技术（crsipr/cas9）对重组大肠杆菌1,5-戊二胺代谢通路中的抑制路径进行敲除，最终得到能高产1,5-戊二胺的菌株。

1. 重组菌株的构建 2. 代谢通路中抑制基因的敲除（crsipr/cas9） 3. 摇瓶发酵验证 一、准备工作: 从保有cas9的ti菌株中提取出cas9质粒(k抗性，质粒编号:kq p002009); 从保有sgrna的菌株中提取出sgrna质粒(s抗性质粒编号:kq p002008); 二、制作含有cas9质粒目的菌株的感受态: 1、将cas9质粒导入到目的菌株中，并涂布在k抗性平板上。

2、挑取单菌落接种于5 ml含50 μg ml-i卡那霉素抗性的lb液体培养基，30 c, 250 rpm培养8h后，按1%接种量接种于50ml含50ugml-1k 抗性的lb液体培养基，30 c，250rpm培养至od600 约为0.2 后，加入终浓度为30 mm的l-阿拉伯糖(灭菌),继续培养至od600 至0.2-0.6后，将培养液转移至50ml离心管中，冰上预冷20 min; 3、4'c下4000rpm离心10min,收集细胞; 4、弃上清，用40ml预冷的无菌水重悬细胞;重复步骤4; 5、弃上清，用20ml预冷的10%(viv)甘油重悬细胞; 6、4c下4000 rpm离心10 min; 7、弃上清，用初始菌液体积的3%预冷10%(vv)甘油重悬， 以每管50 u分装于预冷的1.5 ml离心管中，-80c保存。