文 献 综 述

β-半乳糖苷酶，全名为β-D半乳糖苷半乳糖水解酶，常简称为乳糖酶，能够催化β-D-半乳吡喃糖苷水解或者转糖基化。其广泛存在于动物，植物，微生物中。通过研究β-半乳糖苷酶对牛乳中乳糖的水解，对改善乳糖不耐症，充分发挥牛乳的保健作用和发展乳制品工业具有一定的现实意义。近些年来，在不断发展的生物技术手段的支持下，纯度更高、活性更强的具有一定优良特性的β-半乳糖苷酶已经比较容易获得，也更利于生产上的实际操作。人们对编码此酶的基因结构也有了相当的了解，对其反应作用机理，动力学行为的升入研究，使得此酶的应用不再局限于乳糖的水解，还广泛应用在食品加工其他方面及医药、免疫、环境检测等各个领域。

1.β-半乳糖苷酶的来源

β-半乳糖苷酶的主要来源有①细菌（如乳酸菌、大肠杆菌等）、霉菌（如米曲霉、黑曲霉等）、酵母（如脆壁克鲁维酵母、乳酸克鲁维酵母等）等微生物②植物，尤其是苹果，扁桃③哺乳动物，特别是幼小哺乳动物的小肠中。

1.1β-半乳糖苷酶的筛选

本实验使用粘质沙雷氏菌CJL 08作为菌株来筛选。粘质沙雷氏菌为革兰氏阴性短杆菌，又称灵杆菌，为细菌中最小者，约0.5#215;(0.5～1.0)微米。近球形短杆菌，但形态多样。是一种产生鲜红色素的细菌，可生长在动、植物性食品中。亦是临床上常见的条件致病菌，在机体免疫功能降低时可引起肺部和尿道感染以及败血症。在营养琼脂平板上可产生树枝状向左旋的特别菌落。

通过ONPG可被β-半乳糖苷酶水解为黄色的邻-硝基苯酚（ONP），筛选得到一株活性℃较好的粘质沙雷氏菌CJL 08,在大肠杆菌中克隆和表达粘质沙雷氏菌CJL 08的一个β-半乳糖苷酶YZ1129基因，克隆得到该基因全序列为1386bp,编码461个氨基酸，分子量为50.71kD。

1.2β-半乳糖苷酶的鉴定

根据ONPG可被β-半乳糖苷酶水解为黄色的邻-硝基苯酚（ONP），在48孔板中添加500μl 3mg/ml ONPG,30℃培养24h,观察颜色变化。筛得菌株通过Biolog微生物鉴定系统和16S rDNA序列测试，进行鉴定。

2.β-半乳糖苷酶的克隆与表达