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摘 要

藏红花(Crocus sativus L．)柱头提取物的主要成份为藏红花素、藏红花苦素、藏红花酸等，在治疗心血管疾病、抗肿瘤、抗抑郁等方面起着重要作用，而这些药用价值使藏红花成为新型药物的研究热点。本文以藏红花悬浮培养高产藏红花为目标，考察了主要营养因子碳对藏红花细胞生长和色素合成的影响、在不同时间补碳对藏红花细胞生长和色素合成的影响以及不同初始接种量、不同初始大量离子强度对藏红花细胞生长和色素合成的影响。实验发现提高初始大量元素离子强度对细胞的生长影响不大，对色素合成略有影响。B5培养基色素含量最高，效果最佳。初始蔗糖浓度对细胞生长和产物合成也有一定影响。蔗糖浓度过低，不利于细胞的生长，浓度过高不利于色素的合成，蔗糖初始浓度为25g/L时效果最佳。在15d补10g/L蔗糖有利于细胞的生长，在24d补10g/L蔗糖色素含量达到最高，为124.33mg/g。单独补蔗糖色素合成的高峰期提前，提高了色素的合成与积累。接种量为17%的藏红花细胞生物量为6.40g/L，而接种量为25%的藏红花细胞生物量为7.43g/L，说明增加接种量会有利于细胞生物量的提高。而接种量为25%时，藏红花细胞的色素含量为67.93mg/g，要明显低于接种量为17%的细胞色素含量，接种量为17%的细胞色素含量为82.01mg/g，说明增加细胞接种量会不利于细胞色素的合成。

关键词：藏红花 培养基 碳源 补碳 接种量 细胞生长 色素合成

ABSTRACT

The main components of extract of saffron (Crocus sativus L.) stigma，such as crocin, picrocrocin and crocetin play an important role in the treatment of cardiovascular diseases, anti-tumor, anti-depressant and so on. And these medicinal value make saffron a hot topic in new drug development. In this paper, taking the prolific crocin as the final aim, the effects of carbon, carbon dioxide supplement at different time, different initial inoculum and initial ion intensity on the effect of saffron cell growth and pigment synthesis were investigated. The results showed that the intensity of the initial ion had little effect on the growth of cells, and had a slight effect on the pigment synthesis. The content of pigment in B5 medium was the highest and the effect was best.The initial sucrose concentration had a certain effect on the growth and the synthesis of the product. The concentration of sucrose is too low, which is not conducive to the growth of cells, the concentration is too high, the synthesis of pigment is not good, and the initial concentration of sucrose is the best when 25g/L. In the 15th day, 10g/L sucrose supplementation was conducive to cell growth and the pigment content of 10g/L sucrose supplementation reached the maximum in the 24th day, 124.33mg/g. The peak of sucrose pigment patched in advance, and improved the accumulation of pigment synthesis when with the single supplementation of sucrose. The biomass of 17% inoculation saffron cells was 6.40g/L, while The biomass of 25% inoculation was 7.43g/L, explained that the increase will facilitate the increase of the biomass. Thepigment content of 25% inoculation saffron cells was 67.93mg/g, significantly lower than 17% inoculum concentration, 17% inoculation was 82.01mg/g, explain that the increasethe amount of vaccination would be detrimental to the synthesis of pigment.

Key Words: Saffron medium;carbon source; carbon inoculation; cell growth pigment synthesis

目录

摘要 I

ABSTRACT II

第一章文献综述 1

1.1藏红花简介 1

1.2藏红花的药理性质 1

1.2.1抗氧化作用 2

1.2.2抗癌及抗肿瘤作用 3

1.2.3对心脑血管的作用 4

1.2.4对免疫调节的作用 4

1.2.5对肝胆、肾脏的作用 5

1.2.6 抗抑郁的作用 6

1.3 藏红花色素的稳定性 6

1.4 藏红花资源现状 6

1.5 解决藏红花资源短缺的途径 7

1.5.1化学合成法 7

1.5.2 藏红花的细胞培养 8

1.6 植物细胞生长及次生代谢产物合成研究 9

1.6.1 诱导子--茉莉酸甲酯（MeJA）对植物细胞生长和次生代谢产物合成的影响 9

1.6.2营养因子对植物细胞生长和次生代谢产物合成的影响 10

1.6.3 培养条件对植物细胞生长和次生代谢产物合成的影响 11

第二章材料与方法 13

2.1 实验材料 13

2.1.1 材料 13

2.1.2 试剂 13

2.1.3 培养基 13

2.1.4 实验仪器 14

2.2 实验方法 14

2.2.1 愈伤组织继代培养 14

2.2.2藏红花细胞悬浮培养体系 15

2.3分析方法 15

2.3.1 生物量的测定 15

2.3.2 藏红花色素的提取和测定 16

2.3.3 数据分析 16

第三章结果与分析 17

3.1不同初始营养因子浓度对细胞生长与色素合成的影响 17

3.1.1 不同初始大量元素离子强度对细胞生长与色素合成的影响 17

3.1.2 不同初始蔗糖浓度对细胞生长与色素合成的影响 17

3.2 补碳源对藏红花细胞生长和色素合成的影响 19

3.2.1 不同时间补蔗糖对细胞生长和色素合成的影响 19

3.2.2 补碳源对细胞生长和色素合成动态规律的影响 20

3.3 不同接种量对藏红花细胞生长和色素合成的影响 21

第四章结论与展望 22

参考文献 23

致谢 27

第一章 文献综述

1.1藏红花简介

藏红花(Crocus sativus L．)又名西红花、番红花，是较常用的名贵中药^[1]，目前，藏红花的主产地在希腊、西班牙和伊朗等国，在我国北京、上海、浙江、江苏等地有引种栽培^[2]。我国传统中医认为藏红花性味甘平，入心、肝经，能活血化瘀，散郁开结，主治忧思郁结、胸膈痞闷、吐血、伤寒发狂、惊悸恍惚、妇女闭经、产后瘀血腹痛和跌扑肿痛等^［3］。《本草品汇精要》中有“味甘微，酸，性平温，无毒”，“主散郁调血，宽胸膈，开胃进饮食，久服滋下元，悦颜色，及治伤寒发狂”^[3]。

现代药理学证明，藏红花有治疗心血管疾病、抗肿瘤、抗氧化、抗抑郁等作用^[4]，这些药用价值使藏红花成为新型药物的研究热点。

1.2 藏红花的药理性质

藏红花化学成分主要有类胡萝卜素及其苷类化合物、胡萝卜素化合物、挥发油、氨基酸、三甲基环己烯衍生物的苷类化合物及阜苷^[5]。类胡萝卜素及其苷类的主要组成部分包括类胡萝卜素、藏红花酸及其糖苷；胡萝卜素类主要有α-、β-胡萝卜素，番茄红素和玉米黄质。挥发油的总量占到0.4%~1.3%，主要成分是藏红花醛，占其总量的72%。藏红花还含有多种维生素，如核黄素和硫胺素等化合物，藏红花的蛋白质含量高达20%左右。此外，除了上述成分，藏红花中还含有多种无机元素如Ca、Mg、Fe、Mn、Zn、Cu、Cd、Pb等^[5]。藏红花的药用部位是其柱头，因此对藏红花化学成分的研究也主要集中在柱头。藏红花柱头提取物及其提纯组分藏红花素(crocin) 、藏红花苦素( picrocrocin) 、藏红花酸( crocetin) 等^[6]，在抗肿瘤、免疫调节、治疗心脑血管系统疾病和抑郁症等神经系统疾病方面都具有良好功效，尤其是在抗肿瘤方面功效显著^[7]，其毒副作用明显低于现常用抗肿瘤药物。

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